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人zhuantie蛋白(TF)shiji盒

如果您对该bbin注ce感xing趣的话,可以
bbin注ce名称: 人zhuantie蛋白(TF)shiji盒
bbin注cexing号: TF
bbin注ce展商: ELISAshiji盒
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人zhuantie蛋白(TF)shiji盒  的详xijie绍


zhuantie蛋白(TF)shiji盒

使yong说明书

zhuantie蛋白(TF)shiji盒ji本原理:

本shiji盒采yong双bbin网址夹心ELISA法。yong抗人TFbbin网址bao被yumeibiao板上,实验时样品或biao准品中的人TF与bao被bbin网謋ang岷希卫氲某煞zhi幌磓u。依cijia入sheng物素化的抗人TFbbin网址和辣根过氧化物meibiao记的亲和素。抗人TFbbin网址与结合zaibao被bbin网址蓌i娜薚F结簒iheng物素与亲和素特异性结合而xing成**复合物,游离的成穤hi幌磓u。jia入显色底物(TMB),TMBzai辣根过氧化物mei的催化下呈现蓝色,jia终止液后变成huang色。yongmeibiao仪zai450nm波长处测OD值,人TF浓度与OD450值之间呈正bi,tong过绘制biao准qu线计算出样品中人TF的浓度

zhuantie蛋白(TF)shiji盒描述:

英文名称 Human TF (Transferrin) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 人zhuantie蛋白(TF)meilian**吸附测定shiji盒
货号 X-EL-H0171c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测fang法 双bbin网址夹心法
检测范wei 1.563~100ng/mL 灵敏度 0.938ng/mL

shiji盒组成:

謝ing拿劈/span>

英文名称

规格

保存

  ELISAmeibiao板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干biao准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准品&样品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物素化bbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化bbin网址xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避guang)

mei结合物xi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避guang)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注ce说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特bie说明
*: [96T/48T](打开bao装后请及时检查所觴ing锲肥欠衿肴暾?/span>
#: 一周内使yong可存yu4℃,xu长时间存放或duo磜en箉ongjian议存yu-20.                                      

zhuantie蛋白(TF)shiji盒检测前准备工作:

1. 请提前20分zhong从bing箱中取出shiji盒,平衡至室wen。

2. 将浓缩洗祔ou簓ong双蒸水xi释(1:25)。未yong完的放回4℃。从bing箱中取出的浓缩洗祔ou嚎蒼eng有结晶,属yu正chang现xiang,可yong40℃水浴微jiare使结晶完全溶解后再配制洗祔ou海╦iarewen度bu要超过50℃,使yong时洗祔ou河ξ襴en)。礲i帐箉ong。

3. biao准品yu10000×g离心1分zhong,jia入biao准品&样品xi释液1.0mL至dong干biao准品中,旋jin管gai,静置10分zhong,上下dian倒数ci,待其充分溶解后,yongyi液器将其轻轻hun匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据xu要进行倍眗en∈停ㄗⅲ篵u要zhijiezai反应孔中进行倍眗en∈停ian议配制成以下浓度:按照xi释fang法图例 biao准品&样品xi释液zhijie作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao准品:取0.5mL10ng/mL的上述biao准品jia入含有0.5mLbiao准品&样品xi释液的EP管中,hun匀ji可,其yu浓度依此leitui。 

4. sheng物素化bbin网址工作液:实验前计算当磜en笛樗鵻uyong量(以100μL/孔计),实际配制时应duo配制100-200μL。使yong前15分zhong,以sheng物素化bbin网址xi释液xi释浓缩sheng物素化bbin网址(1:100)成工作浓度。礲i帐箉ong。

5. mei结合物工作液:实验前计算当磜en笛樗鵻uyong量(以100μL/孔计),实际配制时应duo配制100-200μL。使yong前15分zhong,以mei结合物xi释液xi释浓缩HRPmei结合物(1:100)成工作浓度。

礲i帐箉ong。

zhuantie蛋白(TF)shiji盒biao准品xi释fang法图例:(以500μL/管为例,ye可根据实际yong量来xi释,如200μL/管)

            

1. zai各孔中jia入biao准品或样品各100μL 37℃孵育90分zhong

2. jia入100μsheng物素化bbin网址工作液,37℃孵育60分zhong

3. 洗di3ci

4. jia入100μLmei结合物工作液, 37℃孵育30分zhong

5. 洗di5ci

6. jia入90μL底物溶液, 37℃孵育15分zhong左you

7. jia入50μL终止液,立jizai450nm波长处测量OD

8. 结果计算

一、cao作因素对ELISA结果的影响ELISAcao作步骤复杂,cao作bu当将引起较大的误差。以下叙述各个步骤中的影响因素。

1.jia样

2.wen育

3.洗di

4.显色

5.bi色

二、hui区的设置tongchang情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报告的依据。

三、biao本复查ELISA手工检测过程复杂,影响因素较duo,ji使室内质控zai控,ye可neng因孔间差异而造成结果的差异,因此jia大复查力度是保证结果准确性的可kaofang法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康目蓎i、弱阳性biao本及shao见moshi的检测结果进行复查。

si、结果判断和报告changyong下列几种fang法表示结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一般以滴度表示。

3.定量测定 jiyong已知量的biao准品作一xi列xi释后进行ELISA测定,绘制biao准qu线,结果以you羓i炕虻ei表示。zaiELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的biao准qu线。

注yi事项:

仔xi阅读说明书。

检查shiji盒biao签蓌i挠行凇H绻行冢胛鹗箉ong。

按说明书确定所有shiji齐全(数量、体积)。

biao本制备要规范,每份biao本体积要按2-3个复孔以蓌i牧恐票福▃hu存),尽量分装zuo备份。短期内无法实验者,注yi低wen保存。

准备好所有实验额外所xu物品,(眗e鐈i液器,shi管,qing洗器,meibiao仪)。

按说明书将所yongshiji平衡至室wen,根据检测biao本数量确定所xushiji的量。

检查shiji盒内每种shiji的zhu存条件,保证所有shiji均按照shiji盒内说明书tui荐的条件存储。

检查buwen定或者变质的shiji溶液(眗e鏲hen淀或变色)。有些shiji,眗e鏱iao准品xi释液或者检测xi释液,可nengzai设计时就含有chen淀物。所有shijizai祑en雖eibiao板之前,必xu充分hun匀。而youyuchen淀物的特性,zaijia入meibiao板之前,必xubu停搅拌。

保证充分的孵育时间和wen度。

莤ing鹗箉ongbu同sheng产批号的shiji取代蟴hong衧hiji或hun合蟴hong衧hiji。

zaihun合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产sheng。

zai实验开始之前,安排好实验流程。

zai实验开始之前,qing洁工作台。

若有wen题,应与我公si或代理商的技术支持lianxi

zhuantie蛋白(TF)shiji盒结果判断:

1. 每个biao准品的OD值减qu空白孔的OD值后作图,如设謒ei纯祝蛴θ∑淦骄导扑恪R詁iao准品的浓度为横坐biao,OD值为zong坐biao,绘出biao准qu线。亦可以OD值为横坐biao,biao准品的浓度为zong坐biao,绘出biao准qu线。

2. tui荐使yong专业的qu线制作软件,如curve expert 1.31.4,zai软件界mian既可根据样品OD值,youbiao准qu线查出相应的浓度,乘以xi释倍数ui嗫山返命/span>OD值代入biao准qu线的拟合fang程shi,计算出样品浓度,再乘以xi释倍数,糲i返氖导逝ǘ取Ⅻ/span>

3. 若样品OD值高yubiao准qu线上xian,应适当xi释后重测,计算浓度时应乘以xi释倍数。 

zhuantie蛋白(TF)shiji盒有效期wen定性考cha

本shi验以zhuantie蛋白(TF)为例

1.  OD值:

正chang保存条件下有效期内和超过有效期2个月所测OD值bi较

正chang有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分bieyu定值血qing及血jiang中jia入一定量的zhuantie蛋白(TF)biao准品,重复测定并计算其品均值,回收率为测定謉i肜砺壑档腷i率。

        正chang保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa shiji盒回收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分bieyu定值血qing及血jiang中jia入一定量的zhuantie蛋白(TF)biao准品,并将biao本按1:2,1:4,1:8xi释,线性范wei糲i獂i释后样本中zhuantie蛋白(TF)含量的测定謉i肜砺壑档腷i率。

         正chang保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa shiji盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样品测定值的变异xi数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批磜en詊i盒对低值,中值和高值样本进行定量检测,每份样本测定20ci,分bie计算bu同浓度样本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 个bu同批ci的shiji盒分bie对低、謝iao⒏咧刀ㄖ笛窘卸坎舛ǎ 每个样本使yong同一shiji盒重复测定 8 ci,分bie计算bu同浓度样本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正chang保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa shiji盒回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

zhuantie蛋白(TF)shiji盒会出现的wen题及解决办法:

1. jia入反应终止液后,没觴ing黦uang值或吸guang值pian低。

a.原因:未jia入meibiao记物。

解决办法:请按照cao作步骤进衳iaoⅫ/span>

b.原因:shiji盒内容物未neng充分回。

解决办法:确定shiji盒内容物回wen后再进行cao作。

c.原因:室wen太低。

解决办法:若室wen太低(<19),请yucao作步骤4,适当延长wen育时间。

d.原因:未使yongshiji盒的qing洗液qing洗。

解决办法: 请yongshiji盒内所提供的qing洗液qing洗。

e.原因:shiji盒已过有效期xian。

解决办法:请更换成仍zai有效期xian内的shiji簒iaoⅫ/span>

2. biao准qu线线性bu佳,或是平行性bu好。

a.原因:wen育wei置避guangbu好或受dao气流干扰。

解决办法: 请确renwen育wei置既bu透guangyebu透feng(如抽屉内)

b.原因:cao作时间tuo太jiu。

解决办法:请zaifang法shu练后再进行cao作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: jia样品时,请xiao心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:biao准品或meibiao记物所jia入的量bu一zhi。

解决办法:请使yong已校正过的yi液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。

e.原因:添jia样品或shiji的cao作fang法bu正确。

解决办法:jia样品或shiji时,吸头请勿jie触微孔。

f.原因:洗板过程发shengwen题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)

解决办法:请随时监控洗板ji洗板过程,洗完后立ji进行下一步骤。

3. 吸guang值均pian高(或线性bu够dou)

a.原因:室wen太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内wen度,请适当缩短步骤4的wen育时间。

b.原因:底物溶液受dao污染。

解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请bu要再使yong。

c.原因:反应时间超过太jiu。

解决办法:请控制反应时间。

d.原因:meibiao记物污染了盒内其它shiji。

解决办法:使yong过的吸头应立ji丢弃,可避免shiji间相互污染,凡是shiji(特bie是meibiao记物与底物溶液)jie触过的容器应立jiqing洗干jing。(先以漂白水浸泡,再以qing水冲洗干jing,可确保无canliu)

4. 阴性biao准品的吸guang值低yu阳性biao准品的吸guang值。

a.原因:微孔中的shiji未neng充分hun簒iⅫ/span>

解决办法: shijijia完后,xu轻敲盘si周使其充分hun合均匀。

b.原因:洗板过程发shengwen题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添jia样品或meibiao记物的量bu一zhi。

解决办法: 请参考2-d.