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人白jie素1α(IL-1α)shi剂he

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人白jie素1α(IL-1α)shi剂he  de详细jie绍


白jie素1α(IL-1α)shi剂he

使用说明书

白jie素1α(IL-1α)shi剂he基ben原li:

采用双bbin网址夹心ELISA法。用抗人IL-1αbbin网址包被于酶标板shang,实yan时样品huo标准品中de人IL-1α与包被bbin网址结合,游lide成分被xi去。襩ai渭尤肷鷚u素化祄u谷薎L-1αbbin网址和纀ei趸痺u酶标记de亲和素。抗人IL-1αbbin网址与结合zai包被bbin网址shangde人IL-1α结簒i⑸鷚u素与亲和素特异xing结合而形成**复合wu,游lide成分被xi去。加入显色底wu(TMB),TMBzai纀ei趸痺u酶de催化下呈xian蓝色,加zhong止液后bian成黄色。用酶标仪zai450nm波长处测OD值,人IL-1α浓度与OD450值之jian呈zheng比,tong过绘制标准曲线计算出样品中人IL-1αde浓度。

白jie素1α(IL-1α)shi剂he描述:

英文名称 Human IL-1α (Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit
中文名称 人白jie素1α(IL-1α)酶lian**吸附测定shi剂he
货号 X-EL-H0088c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双bbin网址夹心法
检测范wei 3.906~250pg/mL 灵敏度 2.344pg/mL

shi剂he组成:

中文名称

英文名称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&样品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生wu素化bbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素化bbin网址xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合wuxi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应zhong止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请ji时检chasuo有wu品是否齐quanwan整)
#: 一周内使用可存于4℃,需长时jian存放huo多次使用建议存于-20.                                      

白jie素1α(IL-1α)shi剂he检测前准bei工作:

1. 请提前20分zhong从冰箱中取出shi剂he,平衡至室蝜ongⅫ/span>

2. 将浓缩xi涤液用双蒸水xi释(1:25)。未用wande放hui4℃。从冰箱中取出de浓缩xi涤液可能有结jing,属于zheng常xian象,可用40℃水浴微加热使结jingwanquan溶jie后再配制xi涤液(加热wen度不yao超过50℃,使用时xi涤液应为室wen)。当日使用。

3. 标准品10000×gli心1分zhong,加入标准品&样品xi释液1.0mL至dong干标准品中,旋紧管盖,jing置10分zhong,shang下颠倒数次,待其充分溶jie后,用移液qi将其qingqing混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需yao进行bei比xi释(注:不yao直接zai反应kong中进行bei比xi释)。建议配制成yi下浓度:按zhaoxi释方法图例 标准品&样品xi释液直接作为空白kong0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mLdeshang述标准品加入含有0.5mL标准品&样品xi释液deEP管中,混匀即可,其yu浓度yici类tui。 

4. 生wu素化bbin网址工作液:实yan前计算当次实yansuo需用量(yi100μL/kong计),实际配制时应多配制100-200μL。使觤en?/span>15分zhong,yi生wu素化bbin网址xi释液xi释浓缩生wu素化bbin网址(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合wu工作液:实yan前计算当次实yansuo需用量(yi100μL/kong计),实际配制时应多配制100-200μL。使觤en?/span>15分zhong,yi酶结合wuxi释液xi释浓缩HRP酶结合wu(1:100)成工作浓度。

当日使用。

白jie素1α(IL-1α)shi剂he标准品xi释方法图例:(yi500μL/管为例,也可根据实际用量laixi释,如200μL/管)

            

1. zai各kong中加入标准品huo样品各100μL 37℃孵育90分zhong

2. 加入100μ生wu素化bbin网址工作液,37℃孵育60分zhong

3. xi涤3

4. 加入100μL酶结合wu工作液, 37℃孵育30分zhong

5. xi涤5

6. 加入90μL底wu溶液, 37℃孵育15分zhong左右

7. 加入50μLzhong止液,立即zai450nm波长处测量OD

8. 结果计算

一、操作因素对ELISA结果de影xiangELISA操作步骤复杂,操作瞙uai苯鸾xi骴e误差。yi下叙述各个步骤中de影xiang因素。

1.加样

2.wen育

3.xi涤

4.显色

5.比色

二、灰qude设置tong常情kuang下,ELISA定xing实yanyi“阳xing”和“阴xing”lai报告结果,两zhejian有一条分界线被称为“阳xing判秞ian怠保?/span>cut-off valueCO值),这是定xing**测定结果报告deyi据。

三、标ben复chaELISA手工检测过程复杂,影xiang因素较多,即使室内质控zai控,也可能因kongjian差异而zao成结果de差异,因ci加大复cha力度是保证结果准确xing祄u蒶ao方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等xiangmu祄u蓎i、ruo阳xing标benjishaojian模蔶iang募觳饨峁懈碿ha。

四、结果判断和报告常用下lie几种方法表shi结果:

1.定xing测定

2.半定量测定 结果一般yi滴度表shi。

3.定量测定 即用已知量de标准品作一系liexi释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果yi优liang量huodan位表shi。zaiELISA定量检测中每一块反应板du必须绘制xiang应de标准曲线。

注意事xiang:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检chashi剂he标签shangde有效期。如果超过有效期,请勿使用。

癱i得魇槿范╯uo有shi剂齐quan(数量、体积)。

标ben制beiyao规范,每份标ben体积yao按2-3个复kongyishangde量制bei(zhu存),jin量分装zuobei份。短期内wu法实yanzhe,注意diwen保存。

准beihaosuo有实yan额外suo需wu品,(比如移液qi,shi管,qingxiqi,酶标仪)。

癱i得魇榻玸uo用shi剂平衡至室wen,根据检测标ben数量确定suo需shi剂de量。

检chashi剂he内每种shi剂dezhu存条件,保证suo有shi剂均按zhaoshi剂he内说明书tui荐de条件存储。

检cha不稳定huozhebian质deshi剂溶液(比如沉淀huobian色)。有些shi剂,比如标准品xi释液huozhe检测xi释液,可能zai设计蔮en秃谐恋韜u。suo有shi剂zai滴入酶标板之前,必需充分混匀。而由于沉淀wude特xing,zai加入酶标板之前,必需不停搅拌。

保证充分de孵育时jian和wen度。

切勿使用不tong生chan批号deshi剂取代蟴hong衧hi剂huo混合蟴hong衧hi剂。

zai混合huo溶jie蛋白溶液时,避免泡沫chan生。

zai实yan开始之前,安排hao实yan流程。

zai实yan开始之前,qing洁工作台。

若有问题,应与我公sihuo代li商de技术zhi持lian系

白jie素1α(IL-1α)shi剂he结果判断:

1. 每个标准品deOD值减去空白kongdeOD值后作图,如设置复kong,则应取其平均值计算。yi标准品de浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可yiOD值为横坐标,标准品de浓度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. tui荐使用专业de曲线制作ruan件,如curve expert 1.3huo1.4,zairuan件界mian既可根据样品OD值,由标准曲线cha出xiang应de浓度,chengyixi释bei数;亦可将样品deOD值代入标准曲线de拟合方程式,计算出样品浓度,再chengyixi释bei数,即为样品de实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线shang限,应适当xi释后重测,计算浓度时应chengyixi释bei数。 

白jie素1α(IL-1α)shi剂he有效期稳定xing考cha

benshiyanyi白jie素1α(IL-1α)为例

1.  OD值:

zheng常保存条件下有效期内和超过有效期2个月suo测OD值比较

zheng常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.hui收率:分别于定值血qingji血浆中加入一定量de白jie素1α(IL-1α)标准品,重复测定并计算其品均值,hui收率为测定值与li论值de比率。

        zheng常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa shi剂hehui收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线xing:分别于定值血qingji血浆中加入一定量de白jie素1α(IL-1α)标准品,并将标ben按1:2,1:4,1:8xi释,线xing范wei即为xi释后样ben中白jie素1α(IL-1α)含量de测定值与li论值de比率。

         zheng常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa shi剂hehui线xing检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:yi样苀an舛ㄖ礵ebian异系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取tong一批次shi剂he对di值,中值和高值样ben进行定量检测,每份样眏ing舛?span>20次,分别计算不tong浓度样bende平均值和SD值。

批jian差:选取 3 个不tong批次deshi剂he分别对di、中、高值定值样ben进行定量测定, 每个样ben使用tong一shi剂he重复测定 8 次,分别计算不tong浓度样bende平均值ji SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       zheng常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa shi剂hehui精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

白jie素1α(IL-1α)shi剂he会出xiande问题jijiejue办法:

1. 加入反应zhong止液后,没有吸光值huo吸光值偏di。

a.原因:未加入酶标记wu。

jiejue办法:请按zhao操作步骤进行。

b.原因:shi剂he内rongwu未能充分hui。

jiejue办法:确定shi剂he内rongwuhuiwen后再进行操作。

c.原因:室wen太di。

jiejue办法:若室wen太di(<19),请于操作步骤4,适当延长wen育时jian。

d.原因:未使用shi剂hedeqingxi液qingxi。

jiejue办法: 请用shi剂he内suo提gongdeqingxi液qingxi。

e.原因:shi剂he已过有效期限。

jiejue办法:请更换成仍zai有效期限内deshi剂he。

2. 标准曲线线xing不jia,huo是平行xing不hao。

a.原因:wen育位置避光不haohuo受到气流干扰。

jiejue办法: 请确认wen育位置既不透光也不透风(如抽屉内)

b.原因:操作时jian拖太久。

jiejue办法:请zai方法熟lian后再进行操作。

c.原因:微kongjianxiang互wu萰inⅫ/span>

jiejue办法: 加样品时,请小心勿jian出微kong外,yi免zao成其它微kongdewu萰inⅫ/span>

d.原因:标准品huo酶标记wusuo加入de量不一謑ongⅫ/span>

jiejue办法:请使用已校zheng过de移液枪,并确保其与吸头之jian有高度密合xing。

e.原因:tian加样品huoshi剂de操作方法不zheng确。

jiejue办法:加样品huoshi剂时,吸头请勿接chu微kong。

f.原因:xi板过程发生问题(如管路堵sai、xiwan板后未立刻进行下一步骤)

jiejue办法:请随时监控xi板机xi板过程,xiwan后立即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(huo线xing不够陡)

a.原因:室wen太高(>25)

jiejue办法: 若wu法jiangdi室内wen度,请适当缩短步骤4dewen育时jian。

b.原因:底wu溶液受到wu萰inⅫ/span>

jiejue办法: 若发xian底wu溶液已呈xian淡蓝色,请不yao再使用。

c.原因:反应时jian超过太久。

jiejue办法:请控制反应时jian。

d.原因ao副昙莣uwu染liaohe内其它shi剂。

jiejue办法:使用过de吸头应立即丢弃,可避免shi剂jianxiang互wu染,fan是shi剂(特别是酶标记wu与底wu溶液)接chu过derongqi应立即qingxi干jing。(先yi漂白水浸泡,再yiqing水冲xi干jing,可确保wucan留)

4. 阴xing标准品de吸光值di于阳xing标准品de吸光值。

a.原因:微kong中deshi剂未能充分混簒iⅫ/span>

jiejue办法: shi糽iang觲an后,需qing敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因:xi板过程发生问题(tong2-f.)

jiejue办法:请参考2-f.

c.原因:tian加样品huo酶标记wude量不一謑ongⅫ/span>

jiejue办法: 请参考2-d.

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