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人白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒

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bbin注册型号: IL-1ra/IL-1F3
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人白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒  的详细介shao


白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒

使用说ming书

白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒基本原li:

cai用双bbin网址jia心ELISA法。用抗人IL-1rabbin网址包被于mei标板上,实验shi样pinhuo标准pin中的人IL-1rayu包被bbin网址jie合,游离的成穤hi粁iqu。依次加入sheng物素hua的抗人IL-1rabbin网址和辣根过氧hua物mei标ji的亲和素。抗人IL-1rabbin网址yujie合在包被bbin网址上的人IL-1rajie合、sheng物素yu亲和素teyixingjie合而形成**复合物,游离的成穤hi粁iqu。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧hua物mei的催hua下呈现蓝色,加终止ye后bian成黄色。用mei标仪在450nmbo长处ceOD值,人IL-1ra浓度yuOD450值之间呈正比,通过绘zhi标譲i呒苨uan出样pin中人IL-1ra的浓度。

白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒描述:

英文ming称 Human IL-1ra/IF-1F3 (Interleukin 1 Receptor Antagonist) ELISA Kit
中文ming称 人白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)mei联**吸附ce定试剂盒
货号 X-EL-H0089c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双bbin网址jia心法
检ce范围 31.25~2000pg/mL 灵敏度 18.75pg/mL

试剂盒组成:

中文ming称

英文ming称

规格

保存

  ELISAmei标板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻gan标准pin

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准pin&样pin稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物素huabbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素huabbin网址稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmeijie合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

meijie合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xidiye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物rongye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反ying终止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册说ming书

Product  Description

  1 

 

质检bao告

Certificate of Analysis

  1 

 

te别说ming
*: [96T/48T](打开包装后请及shi检查所you物pin是fuqi全完整)
#: 一周内使用ke存于4℃,需长shi间存fanghuoduo次使用建yi存于-20.                                      

白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒检ceqian准备工作:

1. 请提qian20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。

2. 将浓缩xidiye用双蒸水稀释(1:25)。未用完的fang回4℃。从冰箱中取出的浓缩xidiyekenengyoujie晶,属于正常现象,ke用40℃水yu微加热使jie晶完全rong解后zai配zhixidiye(加热温度bu要超过50℃,使用shixidiyeying为室温)。当日使用。

3. 标准pin10000×g离心1分钟,加入标准pin&样pin稀释ye1.0mL至冻gan标准pin中,旋紧guan盖,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分rong解后,用移yeqi将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。ran后根据需要进行bei眗en∈停ㄗⅲ篵u要zhi接在反ying孔中进行bei眗en∈停=▂i配zhi成yi下浓度:按zhao稀释方法图例 标准pin&样pin稀释yezhi接作为空白孔0ng/mL。如配zhi5ng/mL标准pin:取0.5mL10ng/mL的上述标准pin加入含you0.5mL标准pin&样pin稀释ye的EPguan中,混匀即ke,其余浓度依此类推。 

4. sheng物素huabbin网址工作ye:实验qian计suan当次实验所需用liang(yi100μL/孔计),实际配zhishiyingduo配zhi100-200μL。使用qian15分钟,yisheng物素huabbin网址稀释ye稀释浓缩sheng物素huabbin网址(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. meijie合物工作ye:实验qian计suan当次实验所需用liang(yi100μL/孔计),实际配zhishiyingduo配zhi100-200μL。使用qian15分钟,yimeijie合物稀释ye稀释浓缩HRPmeijie合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒标准pin稀释方法图例:(yi500μL/guan为例,也ke根据实际用liang来稀释,如200μL/guan)

            

1. 在各孔中加入标准pinhuo样pin各100μL 37℃fu育90分钟

2. 加入100μsheng物素huabbin网址工作ye,37℃fu育60分钟

3. xidi3

4. 加入100μLmeijie合物工作ye, 37℃fu育30分钟

5. xidi5

6. 加入90μL底物rongye, 37℃fu育15分钟zuoyou

7. 加入50μL终止ye,立即在450nmbo长处celiangOD

8. jie果计suan

一、cao作因素对ELISAjie果的yingxiangELISAcao作buzhou复杂,cao作bu当将yin起絰i蟮奈蟛睢i下叙述各个buzhou中的yingxiang因素。

1.加样

2.温育

3.xidi

4.显色

5.比色

二、灰区的设置通常qing况下,ELISA定xing实验襶u把粜yu焙汀耙跣yu崩碽ao告jie果,两者间you一条分jie线被称为“阳xing判断值”(cut-off valueCO值),这是定xing**ce定jie果bao告的依据。

san、标本复查ELISAshou工检ce过程复杂,yingxiang因素较duo,即使室内质控在控,也keneng因孔间差yi而造成jie果的差yi,因此加da复查力度是保证jie果准quexing的ke靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康膋e疑、弱阳xing标本及少jian模蔶iang募靋ejie果进行复查。

四、jie果判断和bao告常用下列几种方法表shijie果:

1.定xingce定

2.半定liangce定 jie果襤ua銀i滴度表shi。

3.定liangce定 即用已知liang的标准pin作一系列稀释后进行ELISAce定,绘zhi标譲i撸琷ie果yi优良lianghuo单位表shi。在ELISA定liang检ce中每一块反ying板都必xu绘zhi相ying的标譲i摺Ⅻ/span>

注意事项:

仔细阅读说ming书。

检查试剂盒标qian上的you效期。如果超过you效期,请勿使用。

按说ming书que定所you试剂qi全(数liang、体积)。

标本zhi备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔yi上的liangzhi备(贮存),尽liang分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。

准备hao所you实验e外所需物pin,(比如移yeqi,试guan,清xiqi,mei标仪)。

按说ming书将所用试剂平衡至室温,根据检ce标本数liangque定所需试剂的liang。

检查试剂盒内每种试剂的贮存条件,保证所you试剂均按zhao试剂盒内说ming书推jian的条件存chu。

检查bu稳定huo者bian质的试剂rongye(比如chen淀huobian色)。you些试糽i热绫曜紁in稀释yehuo者检ce稀释ye,keneng在设计shi就含youchen淀物。所you试剂在滴入mei标板之qian,必需充分混匀。而由于chen淀物的texing,在加入mei标板之qian,必需bu停搅拌。

保证充分的fu育shi间和温度。

qie勿使用bu同sheng产批号的试剂取dai现you试剂huo混合现you试剂。

在混合huorong解蛋白rongyeshi,避免泡mo产sheng。

在实验开始之qian,安排hao实验流程。

在实验开始之qian,清jie工作台。

ruoyou问题,yingyuwo公司huodaili商的ji术支持联系

白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒jie果判断:

1. 每个标准pin的OD值减qu空白孔的OD值后作图,如设謒ei纯祝騳ing取其平均值计suan。yi标准pin的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标譲i摺R鄈eyiOD值为横坐标,标准pin的浓度为纵坐标,绘出标譲i摺Ⅻ/span>

2. 推jian使用zhuan业的曲线zhi作软件,如curve expert 1.3huo1.4,在软件jie面既ke根据样pinOD值,由标譲i卟槌鱿鄖ing的浓度,乘yi稀释bei数;亦ke将样pin的OD值dai入标譲i叩哪夂戏匠淌剑苨uan出样pin浓度,zai乘yi稀释bei数,即为样pin的实际浓度。

3. ruo样pinOD值高于标譲i呱舷蓿瑈ing适当稀释后重ce,计suan浓度shiying乘yi稀释bei数。 

白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒you效期稳定xingkao察

本试验yi白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)为例

1.  OD值:

正常保存条件下you效期内和超过you效期2个月所ceOD值比较

正常you效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月you效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收lv:穤hi鹩诙ㄖ笛寮把猨iang中加入一定liang的白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)标准pin,重复ce定并计suan其pin均值,回收lv为ce定謉i雔i论值的比lv。

        正常保存条件下you效期内和过you效期2个月elisa 试剂盒回收lv检cejie果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线xing:穤hi鹩诙ㄖ笛寮把猨iang中加入一定liang的白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)标准pin,并将标本按1:2,1:4,1:8稀释,线xing范围即为稀释后样本中白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)含liang的ce定謉i雔i论值的比lv。

         正常保存条件下you效期内和过you效期2个月elisa 试剂盒回线xing检cejie果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精mi度:yi样pince定值的bianyi系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次试剂盒对低值,中值和高值样本进行定liang检ce,每份样本ce定20次,穤hi鸺苨uanbu同浓度样本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 个bu同批次的试剂盒穤hi鸲缘汀⒅小⒏咧刀ㄖ笛窘卸╨iangce定, 每个样本使用同一试剂盒重复ce定 8 次,穤hi鸺苨uanbu同浓度样本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存条件下you效期内和过you效期2个月elisa 试剂盒回精mi度检cejie果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

白介素1受体拮抗剂(IL-1ra/IL-1F3)试剂盒会出现的问题及解决办法:

1. 加入反ying终止ye后,没you吸光值huo吸光值偏低。

a.原因:未加入mei标ji物。

解决办法:请按zhaocao作buzhou进行。

b.原因:试剂盒内容物未neng充分回。

解决办法:que定试剂盒内容物回温后zai进行cao作。

c.原因:室温太低。

解决办法:ruo室温太低(<19),请于cao作buzhou4,适当延长温育shi间。

d.原因:未使用试剂盒的清xiye清xi。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的清xiye清xi。

e.原因:试剂盒已过you效期限。

解决办法:请genghuan成仍在you效期限内的试剂盒。

2. 标譲i呦選ingbu佳,huo是平行xingbuhao。

a.原因:温育位置避光buhaohuo受到气流gan扰。

解决办法: 请queren温育位置既bu透光也bu透风(如抽屉内)

b.原因:cao作shi间拖太jiu。

解决办法:请在方法熟练后zai进行cao作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样pinshi,请小心勿jian出微孔外,yi免造成其它微孔的污染。

d.原因:标准pinhuomei标ji物所加入的liangbu一致。

解决办法:请使用已校正过的移yeqiang,并que保其yu吸头之间you高度mi合衴uⅫ/span>

e.原因:添加样pinhuo试剂的cao作方法bu正que。

解决办法:加样pinhuo试剂shi,吸头请勿接触微孔。

f.原因:xi板过程发sheng问题(如guanlu堵塞、xi完板后未立刻进行下一buzhou)

解决办法:请随shijian控xi板机xi板过程,xi完后立即进行下一buzhou。

3. 吸光值均偏高(huo线xingbugou陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办法: ruo无法jiang低室内温度,请适当缩短buzhou4的温育shi间。

b.原因:底物rongye受到污染。

解决办法: ruo发现底物rongye已呈现淡蓝色,请bu要zai使用。

c.原因:反yingshi间超过太jiu。

解决办法:请控謕in磞ingshi间。

d.原因ao副阩i物污染了盒内其它试剂。

解决办法:使用过的吸头ying立即丢弃,ke避免试剂间相互污染,凡是试剂(te别是mei标ji物yu底物rongye)接触过的容qiying立即清xigan净。(xianyipiao白水浸泡,zaiyi清水冲xigan净,keque保无残liu)

4. 阴xing标准pin的吸光值低于阳xing标准pin的吸光值。

a.原因:微孔中的试剂未neng充分混合。

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因:xi板过程发sheng问题(2-f.)

解决办法:请参kao2-f.

c.原因:添加样pinhuomei标ji物的liangbu一致。

解决办法: 请参kao2-d.

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