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ATCCxi胞 人硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe

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简单介绍

ATCCxi胞 人硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe采用双bbin网址jia心ELISAfa。用kang人FGF7bbin网址包被于酶标板shang,实验时yang品或标准品中的人FGF7与包被bbin网謋ang岷希蝜i的成分被xi去。依ci加rusheng物素化的kang人FGF7bbin网址he辣根过氧化物酶标记的亲he素。kang人FGF7bbin网址与结合在包被bbin网址shang的人FGF7结合、sheng物素与亲he素特异性结合而形成**复合物,游li的成分被xi去。加ru显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后bian成黄色。用酶标仪在450nm波长chuceOD值,人硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe浓度与OD450值之间呈正比,通过hui制标准曲线计算出yang品中人FGF7的浓秖uⅫ/h2>


ATCCxi胞 人硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe  的xiangxi介绍


ATCCxi胞 人硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe

使用说明书

硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jiheji本原理:

采用双bbin网址jia心ELISAfa。用kang人FGF7bbin网址包被于酶标板shang,实验时yang品或标准品中的人FGF7与包被bbin网謋ang岷希蝜i的成分被xi去。依ci加rusheng物素化的kang人FGF7bbin网址he辣根过氧化物酶标记的亲he素。kang人FGF7bbin网址与结合在包被bbin网址shang的人FGF7结合、sheng物素与亲he素特异性结合而形成**复合物,游li的成分被xi去。加ru显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后bian成黄色。用酶标仪在450nm波长chuceOD值,人FGF7浓度与OD450值之间呈正比,通过hui制标准曲线计算出yang品中人FGF7的浓秖u

ATCCxi胞 人硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe描述:

英文mingchen Human FGF7 (Fibroblast Growth Factor 7) ELISA Kit
中文mingchen 人硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)酶联**吸fuce定试jihe
货号 X-EL-H0092c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检cefangfa 双bbin网址jia心fa
检ce范围 31.25~2000pg/mL lingmin度 18.75pg/mL

ATCCxi胞 人硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe组成:

中文mingchen

英文mingchen

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&yang品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓suosheng物素化bbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化bbin网址稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoHRP胒u岷衔铧/span>

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避guang)

胒u岷衔锵∈鸵裹/span>

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoxi涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避guang)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fu膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](da开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)
#: 一周na使用可存于4℃,需长时间存fang或多ci使用建yi存于-20.                                      

硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe检ce前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰xiang中qu出试ji簒iao琾ing衡至室wen。

2. jiang浓suoxi涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的fang回4℃。从冰xiang中qu出的浓suoxi涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水yu微加热使结晶完全溶解后zai配制xi涤液(加热wen度不要超过50℃,使用时xi涤液应为室wen)。当日使用。

3. 标准品10000×gli心1分钟,加ru标准品&yang品稀释液1.0mL至冻干标准品謝iao瑇uanjin管盖,静置10分钟,shang下颠倒数ci,待其充分溶解后,用移液qijiang其qingqing混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍眗en∈停ㄗⅲ翰灰苯釉诜从字薪斜侗ren∈停=▂i配制成yi下浓度:按zhao稀释fangfa图li 标准品&yang品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:qu0.5mL10ng/mL的shang述标准品加ru含有0.5mL标准品&yang品稀释液的EP管謝iao煸燃纯桑溆嗯ǘ纫来死鄑ui。 

4. sheng物素化bbin网址工作液:实验前计算当ci实验所需用量(yi100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,yisheng物素化bbin网址稀释液稀释浓suosheng物素化bbin网址(1:100)成工作浓秖u5比帐褂谩Ⅻ/span>

5. 胒u岷衔锕ぷ饕海菏笛榍凹扑愕眂i实验所需用量(yi100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,yi胒u岷衔锵∈鸵合∈团╯uoHRP胒u岷衔铧/span>(1:100)成工作浓秖uⅫ/span>

当日使用。

硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe标准品稀释fangfa图li:(yi500μL/管为li,也可根据实际用量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加ru标准品或yang品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加ru100μsheng物素化bbin网址工作液,37℃孵育60分钟

3. xi涤3ci

4. 加ru100μL胒u岷衔锕ぷ饕海?/span> 37℃孵育30分钟

5. xi涤5ci

6. 加ru90μL底物溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加ru50μL终止液,立即在450nm波长chuce量OD

8. 结果计算

一、操作因素duiELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作瞙uai眏iang引起絰i蟮奈骳ha。yi下叙述各个步骤中的影响因素。

1.加yang

2.wen育

3.xi涤

4.显色

5.比色

二、灰区的设置通常情况下,ELISA定性实验襶u皔ang衴u県e“yin衴u崩幢ǜ娼峁琹iang者间有一tiao分界线被chen为“yang性pan断值”(cut-off valueCO值),这是定性**ce定结果报告的依据。

三、标本复查ELISAshou工检ce过程复杂,影响因素jiao多,即使室na质控在控,也可能因孔间cha异而造成结果的cha异,因此加大复查li度是保证结果准que性祄u煽縡angfa,比如duiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en頼u祄u梢伞⑷鮵ang性标本及少jian模蔶iang募靋e结果进行复查。

si、结果pan断he报告常用下列ji种fangfa表示结果:

1.定性ce定

2.ban定量ce定 结果襤ua銀i滴度表蔶inⅫ/span>

3.定量ce定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISAce定,hui制标准曲线,结果yi优羓i炕虻ノ槐硎jinT冱/span>ELISA定量检ce中每一块反应板都必须hui制相应的标准曲线。

注意事项:

仔xi阅读说明书。

检查试jihe标签shang的有效qi。如果超过有效qi,请wu使用。

按说明书que定所有试ji齐全(数量、体ji)。

标本制备要规范,每份标本体ji要按2-3个复孔yishang的量制备(贮存),jin量分装做备份。短qina无fa实验者,注意diwen保存。

准备好所有实验额外所需物品,(比如移液qi,试管,清xiqi,酶标仪)。

按说明书jiang所用试jiping衡至室wen,根据检ce标本数量que定所需试ji的量。

检查试jihena每种试ji的贮存tiao件,保证所有试ji均按zhao试jihena说明书tui荐的tiao件存储。

检查不稳定或者bian质的试ji溶液(比如沉dian或bian色)。有xie试ji,比如标准品稀释液或者检ce稀释液,可能在设计时就含有沉dian物。所有试ji在滴ru酶标板之前,必需充分混詑u6鴜ou于沉dian物的特性,在加ru酶标板之前,必需不停搅拌。

保证充分的孵育时间hewen秖uⅫ/span>

切wu使用不同sheng产pi号的试jiqudai现有试ji或混合现有试ji。

在混合或溶解dan白溶液时,避免泡沫产sheng。

在实验开始之前,安pai好实验流程。

在实验开始之前,清洁工作台。

若有问题,应与我公司或dai理商的技shu支chi联系

硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe结果pan断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置复孔,则应qu其ping均值计算。yi标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,hui出标准曲线。亦可yiOD值为横坐标,标准品的浓度为纵坐标,hui出标准曲线。

2. tui荐使用专业的曲线制作ruan件,如curve expert 1.31.4,在ruan件界面既可根据yang品OD值,you标准曲线查出相应的浓度,乘yi稀释倍数;亦可jiangyang品的OD值dairu标准曲线的拟合fang程式,计算出yang苀angǘ龋瑉ai乘yi稀释倍数,糲i獃ang品的实际浓秖uⅫ/span>

3. 若yang品OD值高于标准曲线shang限,应适当稀释后重ce,计算浓度时应乘yi稀释倍数。 

硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihe有效qi稳定性考cha

本试验yi硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)为li

1.  OD值:

正常保存tiao件下有效qinahe超过有效qi2个月所ceOD值比jiao

正常有效qinaOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血清及血浆中加ru一定量的硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)标准品,重复ce定并计算其品均值,回收率为ce定值与理lun值的比率。

        正常保存tiao件下有效qinahe过有效qi2个月elisa 试jihe回收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值血清及血浆中加ru一定量的硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)标准品,并jiang标本按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围糲i∈秃髖ang本中硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)含量的ce定值与理lun值的比率。

         正常保存tiao件下有效qinahe过有效qi2个月elisa 试jihe回线性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jing密度:yiyang苀an舛ㄖ档腷ian异系数CV表蔶inⅫ/span>CV%=SD/meanx100

pinacha:qu同一pici试jiheduidi值,中值he高值yang本进行定量检ce,每份yang本ce定20ci,分别计算不同浓度yang本的ping均值heSD值。

pi间cha:选qu 3 个不同pici的试jihe分别duidi、中、高值定值yang本进行定量ce定, 每个yang本使用同一试jihe重复ce定 8 ci,分别计算不同浓度yang本的ping均值及 SD 值。(pinacha: CV<10%;pi间cha: CV<11%)

       正常保存tiao件下有效qinahe过有效qi2个月elisa 试jihe回jing密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

硈hang宋瑇i胞sheng长因子7(FGF7)试jihehui出现的问题及解决banfa:

1. 加ru反应终止液后,mei有吸guang值或吸guang值偏di。

a.原因:未加ru酶标记物。

解决banfa:请按zhao操作步骤进行。

b.原因:试jihenarong物未能充分回。

解决banfa:que定试jihenarong物回wen后zai进行操作。

c.原因:室wen太di。

解决banfa:若室wen太di(<19),请于操作步骤4,适当延长wen育时间。

d.原因:未使用试jihe的清xi液清xi。

解决banfa: 请用试jihena所提供的清xi液清xi。

e.原因:试jihe已过有效qi限。

解决banfa:请geng换成仍在有效qi限na的试jihe。

2. 标准曲线线性不佳,或是ping行性不好。

a.原因:wen育位置避guang不簃ei騭hou到气流干扰。

解决banfa: 请querenwen育位置既不透guang也不透风(如抽屉na)

b.原因:操作时间拖太久。

解决banfa:请在fangfa熟练后zai进行操作。

c.原因:微孔间相互污萰inⅫ/span>

解决banfa: 加yang品时,请小心wu溅出微孔外,yi免造成其它微孔的污萰inⅫ/span>

d.原因:标准品或酶标记物所加ru的量不一致。

解决banfa:请使用已xiao正过的移液枪,并que保其与吸头之间有高度密合衴uⅫ/span>

e.原因:添加yang品或试ji的操作fangfa不正que。

解决banfa:加yang品或试ji时,吸头请wu接触微孔。

f.原因:xi板过程fasheng问题(如管lu堵塞、xi完板后未立刻进行下一步骤)

解决banfa:请随时监控xi板机xi板过程,xi完后立即进行下一步骤。

3. 吸guang值均偏高(或线性不够陡)

a.原因:室wen太高(>25)

解决banfa: 若无fajiangdi室nawen度,请适当suo短步骤4的wen育时间。

b.原因:底物溶液shou到污萰inⅫ/span>

解决banfa: 若fa现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要zai使用。

c.原因:反应时间超过太久。

解决banfa:请控制反应时间。

d.原因:酶标记物污染了hena其它试ji。

解决banfa:使用过的吸头应立即丢qi,可避免试ji间相互污染,fan是试ji(特别蕅iao副昙俏镉氲孜锶芤裹/span>)接触过的rongqi应立即清xi干净。(先yipiao白水浸泡,zaiyi清水冲xi干净,可que保无残留)

4. yin性标准品的吸guang值di于yang性标准品的吸guang值。

a.原因:微孔中的试ji未能充分混合。

解决banfa: 试ji加完后,需qingqiao盘si周使其充分混合均詑uⅫ/span>

b.原因:xi板过程fasheng问题(2-f.)

解决banfa:请参考2-f.

c.原因:添加yang品或酶标记物的量不一致。

解决banfa: 请参考2-d.

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