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人fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒

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bbin注册名称: 人fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒
bbin注册型号: ARSB
bbin注册展商: ELISA试剂盒
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人fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒  的详xi介shao


fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒

使yong说明书

fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒基ben原li:

ben试剂盒caiyong双bbinwang謋ang衳inELISA法。yong抗人ARSBbbinwang址包被于mei标banshang,实yan时样品huo标zhun品中的人ARSB与包被bbinwang謋ang岷希卫氲某煞zhi幌慈ァRlai渭觬usheng物素化的抗人ARSBbbinwang址和辣根过yang化物mei标ji的亲和素。抗人ARSBbbinwang址与结合zai包被bbinwang址shang的人ARSB结簒iheng物素与亲和素特异性结合而形成**复合物,游离的成穤hi幌慈ァ<觬u显色底物(TMB),TMBzai辣根过yang化物mei的催化xia呈现蓝色,加终止液后bian成黄色。yongmei标仪zai450nm波长处ceOD值,人ARSB浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标zhunqu线ji算出样品中人ARSB的浓度。

fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒miao述:

英文名称 Human ARSB (Arylsulfatase B) ELISA Kit
中文名称 人fang基硫酸酯meiB(ARSB)mei联**xi附ceding试剂盒
货号 X-EL-H0419c 謟hi簏/span> Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检cefang法 双bbinwang謋ang衳in法
检ce范wei 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

试剂盒组成:

中文名称

英文名称

规ge

bao存

  ELISAmei标ban(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标zhun品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标zhun品&样品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物素化bbinwang址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化bbinwang址xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

mei结合物xi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封ban竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

bbin注册说明书

Product  Description

  1 fen

 

zhi检报告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别说明
*: [96T/48T](打kai包装后qing及时检查所有物品是否齐quanwan整)
#: yi周内使yong可存于4℃,需长时间存fanghuo多磜en箉ong建yi存于-20.                                      

fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒检ce前zhun备工作:

1. qing提前20分钟从冰箱中取出试剂簒iao琾ingheng至室温。

2. 将浓缩洗涤液yong双蒸水xi释(1:25)。未yongwan的fanghui4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可yong40℃水浴微加热使结晶wanquan溶解后再配制洗涤液(加热温度不yao超过50℃,使yong时洗涤液应为室温)。当日使yong。

3. 标zhun品10000×g离xin1分钟,加ru标zhun品&样品xi释液1.0mL至冻干标zhun品謝iao艄芨牵仓曼/span>10分钟,shangxiadian倒数次,待其chong分溶解后,yongyi液器将其轻轻混yun(浓度为8000pg/mL)。然后根据需yao进行bei比xi释(注:不yaozhi接zai反应kong中进行bei比xi释)。建yi配制成以xia浓度:an照xi释fang法图例 标zhun品&样品xi释液zhi接作为空白kong0ng/mL。如配制5ng/mL标zhun品:取0.5mL10ng/mL的shang述标zhun苀ang觬uhan有0.5mL标zhun品&样品xi释液的EP管謝iao靬unji可,其yu浓度襩ai死嗤啤Ⅻ/span> 

4. sheng物素化bbinwang址工作液:实yan前ji算当磜en祔an所需yong量(以100μL/kongji),实际配制时应多配制100-200μL。使yong前15分钟,以sheng物素化bbinwang址xi释液xi释浓缩sheng物素化bbinwang址(1:100)成工作浓度。当日使yong。

5. mei结合物工作液:实yan前ji算当磜en祔an所需yong量(以100μL/kongji),实际配制时应多配制100-200μL。使yong前15分钟,以mei结合物xi释液xi释浓缩HRPmei结合物(1:100)成工作浓度。

当日使yong。

fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒标zhun品xi释fang法图例:(以500μL/管为例,ye可根据实际yong量laixi释,如200μL/管)

            

1. zai各kong中加ru标zhun品huo样品各100μL 37℃孵yu90分钟

2. 加ru100μsheng物素化bbinwang址工作液,37℃孵yu60分钟

3. 洗涤3

4. 加ru100μLmei结合物工作液, 37℃孵yu30分钟

5. 洗涤5

6. 加ru90μL底物溶液, 37℃孵yu15分钟左右

7. 加ru50μL终止液,lijizai450nm波长处ce量OD

8. 结果ji算

yi、操作因素对ELISA结果的影响ELISA操作步zhou复杂,操作不当将引起jiao大的误cha。以xia叙述各个步zhou中的影响因素。

1.加样

2.温yu

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、hui区的设置通常情况xia,ELISAding性实yan以“阳性”和“yin性”lai报告结果,两者间有yi条分界线被称为“阳性舩ie现怠bao?/span>cut-off valueCO值),这是ding性**ceding结果报告的依据。

三、标ben复查ELISA手工检ce过cheng复杂,影响因素jiao多,ji使室内zhikongzaikong,ye可能因kong间cha异而造成结果的cha异,因ci加大复查力度是bao证结果zhun确性的可kaofang法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、弱阳性标ben及少见模式的检ce结果进行复查。

四、结果舩ie虾捅ǜ娉ongxia列ji种fang法表示结果:

1.ding性ceding

2.半ding量ceding 结果yi般以滴度表示。

3.ding量ceding jiyong已知量的标zhun品作yi系列xi释后进行ELISAceding,绘制标zhunqu线,结果以优良量huo单位表示。zaiELISAding羕ao靋e中每yi块反应bandu必须绘制xiang应的标zhunqu线。

注意事项:

仔xi阅读说明书。

检查试剂盒标签shang的有效期。如果超过有效期,qing勿使yong。

an说明书确ding所有试剂齐quan(数量、体ji)。

标ben制备yao规范,每fen标ben体jiyaoan2-3个复kong以shang的量制备(贮存),尽量分装做备fen。短期内无法实yan者,注意低温bao存。

zhun备好所有实yan额wai所需物品,(比如yi液器,试管,清洗器,mei标仪)。

an说明书将所yong试剂pingheng至室温,根据检ce标ben数量确ding所需试剂的量。

检查试剂簒in诿恐zhi约恋闹嫣鮦ian,bao证所有试剂均an照试剂簒in谒得魇橥萍龅奶鮦ian存储。

检查不稳dinghuo者bianzhi的试剂溶液(比如沉淀huobian色)。有些试剂,比如标zhun品xi释液huo者检cexi释液,可能zai设ji蔮en蚳an有沉淀物。所有试剂zai滴rumei标ban之前,必需chong分混yun。而由于沉淀物的特性,zai加rumei标ban之前,必需不停jiao拌。

bao证chong分的孵yu时间和温度。

切勿使yong不同sheng产批号的试剂取代现有试剂huo混合现有试剂。

zai混合huo溶解蛋白溶液蔮ao苊馀菽鷖heng。

zai实yankai始之前,an排好实yan流cheng。

zai实yankai始之前,清洁工作tai。

若有wenti,应与wo公薺ing虼鷏i商的技术支chi联系

fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒结果舩ie吸/span>:

1. 每个标zhun品的OD值减去空白kong的OD值后作图,如设謒ei磌ong,则应取其ping均值ji算。以标zhun品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标zhunqu线。亦可以OD值为横坐标,标zhun品的浓度为纵坐标,绘出标zhunqu线。

2. 推荐使yong专业的qu线制作软jian,如curve expert 1.3huo1.4,zai软jian界面既可根据样品OD值,由标zhunqu线查出xiang应的浓度,乘以xi释bei数ui嗫山返命/span>OD值代ru标zhunqu线的拟合fangcheng式,ji算出样苀angǘ龋俪艘詘i释bei数,ji为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标zhunqu线shang限,应适当xi释后重ce,ji算浓度时应乘以xi释bei数。 

fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒有效期稳ding性kao察

ben试yan以fang基硫酸酯meiB(ARSB)为例

1.  OD值:

正常bao存条jianxia有效期内和超过有效期2个月所ceOD值比jiao

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.hui收率:穤hi鹩赿ing值血清及血浆中加ruyiding量的fang基硫酸酯meiB(ARSB)标zhun品,重复ceding并ji算其品均值,hui收率为ceding值与li论值的比率。

        正常bao存条jianxia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒hui收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:穤hi鹩赿ing值血清及血浆中加ruyiding量的fang基硫酸酯meiB(ARSB)标zhun品,并将标benan1:2,1:4,1:8xi释,线性范weiji为xi释后样ben中fang基硫酸酯meiB(ARSB)han量的ceding值与li论值的比率。

         正常bao存条jianxia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒hui线性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样品ceding值的bian异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内cha:取同yi批磜en约梁xie缘椭担兄岛透咧笛鵥en进衳iekao靋e,每fen样benceding20次,穤hi餵i算不同浓度样ben的ping均值和SD值。

批间cha:选取 3 个不同批次的试剂盒穤hi鸲缘汀⒅小⒏咧礵ing值样ben进衳ie縞eding, 每个样ben使yong同yi试剂盒重复ceding 8 次,穤hi餵i算不同浓度样ben的ping均值及 SD 值。(批内cha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       正常bao存条jianxia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒hui精密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

fang基硫酸酯meiB(ARSB)试剂盒会出现的wenti及解决办法:

1. 加ru反应终止液后,没有xi光值huoxi光值pian低。

a.原因:未加rumei标ji物。

解决办法:qingan照操作步zhou进行。

b.原因:试剂簒in谌菸镂茨躢hong分hui。

解决办法:确ding试剂簒in谌菸飄ui温后再进行操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),qing于操作步zhou4,适当延长温yu时间。

d.原因:未使yong试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: qingyong试剂簒in谒峁┑那逑匆呵逑础Ⅻ/span>

e.原因:试剂盒已过有效期限。

解决办法:qinggeng换成仍zai有效期限内的试剂盒。

2. 标zhunqu线线性不佳,huo是ping行性不好。

a.原因:温yu位置避光不好huo受dao气流干扰。

解决办法: qing确认温yu位置既不透光ye不透风(如chou屉内)

b.原因:操作时间tuo太久。

解决办法:qingzaifang法熟练后再进行操作。

c.原因:微kong间xiang互污染。

解决办法: 加样品蔮ao琿ing小xin勿jian出微kongwai,以免造成其它微kong的污染。

d.原因:标zhun品huomei标ji物所加ru的量不yi致。

解决办法:qing使yong已xiao正过的yi液qiang,并确bao其与xitou之间有高度密合性。

e.原因:添加样品huo试剂的操作fang法不正确。

解决办法:加样品huo试剂蔮ao瑇itouqing勿接触微kong。

f.原因:洗ban过cheng发shengwenti(如管路堵塞、洗wanban后未li刻进行xiayi步zhou)

解决办法:qing随时监kong洗banji洗ban过cheng,洗wan后liji进行xiayi步zhou。

3. xi光值均pian高(huo线性不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内温度,qing适当缩短步zhou4的温yu时间。

b.原因:底物溶液受dao污染。

解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,qing不yao再使yong。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办法:qingkong制反应时间。

d.原因:mei标ji物污染了簒in谄渌约痢Ⅻ/span>

解决办法:使yong过的xitou应liji丢弃,可避免试剂间xiang互污染,凡是试剂(特别是mei标ji物与底物溶液)接触过的容器应liji清洗干jing。(xian以漂白水浸泡,再以清水chong洗干jing,可确bao无残留)

4. yin性标zhun品的xi光值低于阳性标zhun品的xi光值。

a.原因:微kong中的试剂未能chong分混簒iⅫ/span>

解决办法: 试剂加wan后,需轻qiao盘四周使其chong分混合均yun。

b.原因:洗ban过cheng发shengwenti(2-f.)

解决办法:qing参kao2-f.

c.原因:添加样品huomei标ji物的量不yi致。

解决办法: qing参kao2-d.

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