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人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒 bbin网址zhibeiliu程

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bbin注册名chen: 人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒 bbin网址zhibeiliu程
bbin注册xing号: FOS
bbin注册展商: ELISAshi剂盒
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简dan介shao

人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒 bbin网址zhibeiliu程采用双bbin网址夹心ELISA法。用kang人FOSbbin网址包被于酶标板上,实验shiyang品或标zhun品zhongde人FOS与包被bbin网址结合,you离de成分被xi去。yici加入生物素化dekang人FOSbbin网址和纀ei齳ang化物酶标记de亲和素。kang人FOSbbin网址与结合在包被bbin网址上de人FOS结合、生物素与亲和素特异性结合而形成**复合物,you离de成分被xi去。加入显色底物(TMB),TMB在纀ei齳ang化物酶de催化下呈现蓝色,加zhongzhiyehou变成黄色。用酶标yi在450nm波长处ceOD值,人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒浓度与OD450值之jian呈zheng比,通过绘zhi标zhun曲线计算出yang品zhong人FOSde浓度。


人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒 bbin网址zhibeiliu程  de详细介shao


人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒 bbin网址zhibeiliu程

使用shuo明书

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒ji本原理:

本shi剂盒采用双bbin网址夹心ELISA法。用kang人FOSbbin网址包被于酶标板上,实验shiyang品或标zhun品zhongde人FOS与包被bbin网址结合,you离de成分被xi去。yici加入生物素化dekang人FOSbbin网址和纀ei齳ang化物酶标记de亲和素。kang人FOSbbin网址与结合在包被bbin网址上de人FOS结合、生物素与亲和素特异性结合而形成**复合物,you离de成分被xi去。加入显色底物(TMB),TMB在纀ei齳ang化物酶de催化下呈现蓝色,加zhongzhiyehou变成黄色。用酶标yi在450nm波长处ceOD值,人FOS浓度与OD450值之jian呈zheng比,通过绘zhi标zhun曲线计算出yang品zhong人FOSde浓度。

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒描述:

英文名chen Human V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog (FOS) ELISA Kit
zhong文名chen 人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)酶联**吸附ce定shi剂盒
货号 E-EL-H0695c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双bbin网址夹心法
检ce范围 0.156~10ng/mL 灵min度 0.094ng/mL

人V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒 bbin网址zhibeiliu程组成:

zhong文名chen

英文名chen

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标zhun品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标zhun品&yang品稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化bbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化bbin网址稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi涤ye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物rongye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反yingzhongzhiye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册shuo明书

Product  Description

  1 

 

质检bao告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuo明
*: [96T/48T](da开包装hou请jishi检cha所有物品是否齐全完整)
#: 一周内使用可存于4℃,需长shijian存放或多磜en褂媒ㄒ榇嬗冱/span>-20.                                      

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒检ce前zhunbei工作:

1. 请ti前20分钟从冰xiangzhong取出shi剂盒,ping衡至室蝜ongⅫ/span>

2. jiang浓缩xi涤ye用双蒸shui稀释(1:25)。未用完de放hui4℃。从冰xiangzhong取出de浓缩xi涤ye可能有结晶,属于zheng常现象,可用40℃shui浴微加热使结晶完全rong解hou再配zhixi涤ye(加热温度不要超过50℃,使用shixi涤yeying为室温)。当日使用。

3. 标zhun品10000×g离心1分钟,加入标zhun品&yang品稀释ye1.0mL至dong干标zhun品zhong,xuan紧管gai,静置10分钟,上下颠dao数ci,待其充分rong解hou,用移ye器jiang其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然hou根据需要进行bei比稀释(注:不要直接在反yingkongzhong进行bei比稀释)。建议配zhi成以下浓度:按照稀蕋ou椒╰u例 标zhun品&yang品稀释ye直接作为空白kong0ng/mL。如配zhi5ng/mL标zhun品:取0.5mL10ng/mLde上述标zhun品加入han有0.5mL标zhun品&yang品稀释yedeEP管zhong,混匀即可,其yu浓度yi此类推。 

4. 生物素化bbin网址工作ye:实验前计算当磜en笛樗栌胠iang(以100μL/kong计),实际配zhishiying多配zhi100-200μL。使觤en?/span>15分钟,以生物素化bbin网址稀释ye稀释浓缩生物素化bbin网址(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作ye:实验前计算当磜en笛樗栌胠iang(以100μL/kong计),实际配zhishiying多配zhi100-200μL。使觤en?/span>15分钟,以酶结合物稀释ye稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒标zhun品稀蕋ou椒╰u例:(以500μL/管为例,也可根据实际用liang来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各kongzhong加入标zhun品或yang品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生物素化bbin网址工作ye,37℃孵育60分钟

3. xi涤3ci

4. 加入100μL酶结合物工作ye, 37℃孵育30分钟

5. xi涤5ci

6. 加入90μL底物rongye, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μLzhongzhiye,li即在450nm波长处celiangOD

8. 结guo计算

一、操作因素对ELISA结guode影xiangELISA操作步zhou复杂,操作不当jiangyinqi絰i骴ewucha。以下xu述各个步zhouzhongde影xiang因素。

1.加yang

2.温育

3.xi涤

4.显色

5.比色

二、粂i鴇e设置通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来bao告结guo,两zhejian有一tiao分界线被chen为“阳性舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),这是定性**ce定结guobao告deyi据。

三、标本复chaELISA蕑hiぜ靋e过程复杂,影xiang因素较多,即使室内质控在控,也可能因kongjiancha异而造成结guodecha异,因此加大复cha力度是保证结guozhun确性de可靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项mude可疑、弱阳衴uan瓯緅ishao见模式de检ce结guo进行复cha。

si、结guo舩ie虾蚥ao告常用下列ji种方法biao示结guo:

1.定性ce定

2.半定liangce定 结guo一般以滴度biao示。

3.定liangce定 即用yi知liangde标zhun品作一xi列稀释hou进行ELISAce定,绘zhi标zhun曲线,结guo以优良liang或dan位biao示。在ELISA定liang检cezhong每一块反ying板都必xu绘zhi相yingde标zhun曲线。

注意shi项:

仔细阅读shuo明书。

检chashi剂盒标签上de有效期。如guo超过有效期,请勿使用。

按shuo明书确定所有shi剂齐全(数liang、体积)。

标本zhibei要规范,每份标本体积要按2-3个复kong以上deliangzhibei(贮存),尽liang穤hong白鯾ei份。短期内无法实验zhe,注意低温保存。

zhunbei好所有实验额wai所需物品,(比如移ye器,shi管,清xi器,酶标yi)。

按shuo明书jiang所用shi剂ping衡至室温,根据检ce标本数liang确定所需shi剂deliang。

检chashi剂盒内每种shi剂de贮存tiao件,保证所有shi剂均按照shi剂盒内shuo明书推荐detiao件存储。

检cha不wen定或zhe变质deshi剂rongye(比如沉淀或变色)。有xieshi剂,比如标zhun品稀释ye或zhe检ce稀释ye,可能在设计shijiuhan有沉淀物。所有shi剂在祑en朊副臧逯埃匦璩浞只煸取6捎诔恋砦飀e特性,在加入酶标板之前,必需不停搅拌。

保证充分de孵育shijian和温度。

切勿使用不同生产批号deshi剂取dai现有shi剂或混合现有shi剂。

在混合或rong解蛋白rongyeshi,避免泡沫产生。

在实验开始之前,an排好实验liu程。

在实验开始之前,清洁工作台。

若有wen题,ying与我gongsi或dai理商de技术支持联xi

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒结guo舩ie吸/span>:

1. 每个标zhun品deOD值减去空白kongdeOD值hou作tu,如设置复kong,zeying取其ping均值计算。襶uan陑hun品de浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标zhun曲线。亦可以OD值为横坐标,标zhun品de浓度为纵坐标,绘出标zhun曲线。

2. 推荐使用专业de曲线zhi作软件,如curve expert 1.31.4,在软件界面既可根据yang品OD值,由标zhun曲线cha出相yingde浓度,乘以稀释bei数;亦可jiangyang品deOD值dai入标zhun曲线de拟合方程式,计算出yang品浓度,再乘以稀释bei数,糲i獃ang品de实际浓度。

3. 若yang品OD值高于标zhun曲线上限,ying适当稀释hou重ce,计算浓度shiying乘以稀释bei数。 

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒有效期wen定性kao察

本shi验以V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)为例

1.  OD值:

zheng常保存tiao件下有效期内和超过有效期2个yue所ceOD值比较

zheng常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个yue有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.hui收率:分别于定值血清ji血浆zhong加入襤uan╨iangdeV-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)标zhun品,重复ce定并计算其品均值,hui收率为ce定值与理lun值de比率。

        zheng常保存tiao件下有效期内和过有效期2个yueelisa shi剂盒hui收率检ce结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值血清ji血浆zhong加入襤uan╨iangdeV-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)标zhun品,并jiang标本按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围糲i∈蚳ouyang本zhongV-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)hanliangdece定值与理lun值de比率。

         zheng常保存tiao件下有效期内和过有效期2个yueelisa shi剂盒hui线性检ce结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jing密度:以yang品ce定值de变异xi数CVbiao示。CV%=SD/meanx100

批内cha:取同一批cishi剂簒ie缘椭担瑉hong值和高值yang本进衳ie╨iang检ce,每份yang本ce定20ci,分别计算不同浓度yang本deping均值和SD值。

批jiancha:选取 3 个不同批cideshi剂盒分别对低、zhong、高值定值yang本进衳ie╨iangce定, 每个yang本使用同一shi剂盒重复ce定 8 ci,分别计算不同浓度yang本deping均值ji SD 值。(批内cha: CV<10%;批jiancha: CV<11%)

       zheng常保存tiao件下有效期内和过有效期2个yueelisa shi剂盒huijing密度检ce结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

V-Fos-FBJ骨肉瘤病毒癌ji因同yuan物(FOS)shi剂盒会出现dewen题ji解决办法:

1. 加入反yingzhongzhiyehou,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步zhou进衳iaoⅫ/span>

b.原因:shi剂盒内容物未能充分hui。

解决办法:确定shi剂盒内容物hui温hou再进行操作。

c.原因:室温tai低。

解决办法:若室温tai低(<19),请于操作步zhou4,适当yan长温育shijian。

d.原因:未使用shi剂盒de清xiye清xi。

解决办法: 请用shi剂盒内所ti供de清xiye清xi。

e.原因:shi剂盒yi过有效期限。

解决办法:请更换成仍在有效期限内deshi剂簒iaoⅫ/span>

2. 标zhun曲线线性不佳,或是ping行性不好。

a.原因:温育位置避光不好或受到气liu干扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透feng(如抽ti内)

b.原因:操作shijian拖taijiu。

解决办法:请在方法熟练hou再进行操作。

c.原因:微kongjian相互污染。

解决办法: 加yang品shi,请xiao心勿溅出微kongwai,以免造成其ta微kongde污染。

d.原因:标zhun品或酶标记物所加入deliang不一謑ongⅫ/span>

解决办法:请使用yi校zheng过de移ye枪,并确保其与吸tou之jian有高度密合性。

e.原因:添加yang品或shi剂de操作方法不zheng确。

解决办法:加yang品或shi剂shi,吸tou请勿接触微kong。

f.原因:xi板过程发生wen题(如管路堵塞、xi完板hou未li刻进行下一步zhou)

解决办法:请随shi监控xi板机xi板过程,xi完houli即进行下一步zhou。

3. 吸光值均偏高(或线性不筯uan伏/span>)

a.原因:室温tai高(>25)

解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步zhou4de温育shijian。

b.原因:底物rongye受到污染。

解决办法: 若发现底物rongyeyi呈现dan蓝色,请不要再使用。

c.原因:反yingshijian超过taijiu。

解决办法:请控zhi反yingshijian。

d.原因:酶标记物污染了盒内其tashi剂。

解决办法:使用过de吸touyingli即丢弃,可避免shi剂jian相互污染,凡是shi剂(特别是酶标记物与底物rongye)接触过de容器yingli即清xi干净。(先以漂白shui浸泡,再以清shui冲xi干净,可确保无残留)

4. 阴衴uan陑hun品de吸光值低于阳衴uan陑hun品de吸光值。

a.原因:微kongzhongdeshi剂未能充分混合。

解决办法: shi剂加完hou,需轻敲盘si周使其充分混合均匀。

b.原因:xi板过程发生wen题(2-f.)

解决办法:请参kao2-f.

c.原因:添加yang品或酶标记物deliang不一謑ongⅫ/span>

解决办法: 请参kao2-d.

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