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人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒

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bbinzhu册名称: 人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒
bbinzhu册型号: CLDN5
bbinzhu册zhan商: ELISA试剂盒
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jian单介绍

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人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒  de详蟜u樯埸/font>


人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒

shi用说明书

人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒基本yuan理:

本试剂盒采用双bbin网址夹xinELISA法。用抗人CLDN5bbin网址包被yu酶biao板上,实验时样pin或biao准苀en衐e人CLDN5yu包被bbin网址结合,you离de成fen被洗去。yi次加入生物素化de抗人CLDN5bbin网址和辣根过氧化物酶biao记deqin和素。抗人CLDN5bbin网址yu结合zai包被bbin网址上de人CLDN5结合、生物素yuqin和素特异性结合而形成**复合物,you离de成fen被洗去。加入显se底物(TMB),TMBzai辣根过氧化物酶decui化下呈现蓝se,加zhong止液hou变成huangse。用酶biao仪zai450nmbo长处测OD值,人CLDN5浓度yuOD450值zhijian呈正比,通过绘制biao准曲线计算chu样苀en腥薈LDN5de浓秖uⅫ/span>

人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒描shu:

英文名称 Human CLDN5 (Claudin 5) ELISA Kit
中文名称 人封闭蛋白5(CLDN5)酶联**xifu测定试剂盒
货号 X-EL-H1630c 种shu Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双bbin网址夹xin法
检测范围 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

试剂盒zu成:

中文名称

英文名称

规格

保cun

  ELISA酶biao板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao准pin

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准pin&样pin稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化bbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化bbin网址稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP胒u岷衔铧/span>

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

胒u岷衔锵∈鸵裹/span>

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(避光)

反应zhong止液

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

bbinzhu册说明书

Product  Description

  1 

 

謘hi毂ǜ妩/span>

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](da开包装hou请ji时检chasuo有物pin是fu齐全完整)
#: 
yizhou内shi用可cunyu4℃,需长时jiancun放或多次shi用建议cunyu-20.                                      

人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒检测qian准备gong作:

1. 请提qian20fen钟从冰箱中quchu试剂盒,平衡至室温。

2. jiang浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完de放hui4℃。从冰箱中quchude浓缩洗涤液可能有结晶,shuyu正常现象,可用40℃水浴微加热shi结晶完全溶解hou再配制洗涤液(加热温度瞙ui?/span>50℃,shi用时洗涤液应wei室温)。当日shi用。

3. biao准pinyu10000×g离xin1fen钟,加入biao准pin&样pin稀释液1.0mL至冻干biao准苀en校艄芨牵琷ing置10fen钟,上下颠倒数次,待其充fen溶解hou,用yi液器jiang其轻轻混匀(浓度wei8000pg/mL)。然hou根据需yao进行倍比稀释(zhu:瞙ui眏iezai反应孔中进行倍比稀释)。建议配制成yi下浓度:an照稀释方法图例 biao准pin&样pin稀释液直jie作wei空白孔0ng/mL。ru配制5ng/mLbiao准pin:qu0.5mL10ng/mLde上shubiao准pin加入含有0.5mLbiao准pin&样pin稀释液deEP管中,混匀即可,其余浓度yi磗i鄑ui。 

4. 生物素化bbin网址gong作液:实验qian计算当次实验suo需用liang(yi100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。shi用qian15fen钟,yi生物素化bbin网址稀释液稀释浓缩生物素化bbin网址(1:100)成gong作浓秖u5比誷hi用。

5. 胒u岷衔飃ong作液:实验qian计算当次实验suo需用liang(yi100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。shi用qian15fen钟,yi胒u岷衔锵∈鸵合∈团ㄋ酎/span>HRP胒u岷衔铧/span>(1:100)成gong作浓秖uⅫ/span>

当日shi用。

人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒biao准pin稀释方法图例:(yi500μL/管wei例,也可根据实际用liang来稀释,ru200μL/管)

            

1. zaige孔中加入biao准pin或样pinge100μL 37℃fu育90fen钟

2. 加入100μ生物素化bbin网址gong作液,37℃fu育60fen钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL胒u岷衔飃ong作液, 37℃fu育30fen钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃fu育15fen钟左右

7. 加入50μLzhong止液,立即zai450nmbo长处测liangOD

8. 结果计算

yi、操作因素对ELISA结果de影xiangELISA操作bu骤复杂,操作瞙uai眏iang引起较大de误差。yi下叙shuge个bu骤中de影xiang因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显se

5.比se

er、huiqude设置通常情况下,ELISA定性实验yi“阳性”和“阴性”来报告结果,两者jian有yi条fen界线被称wei“阳性判断值”(cut-off valueCO值),zhe是定性**测定结果报告deyi据。

三、biao本复chaELISA手gong检测过程复杂,影xiang因素较多,即shi室内zhi控zai控,也可能因孔jian差异而造成结果de差异,因此加大复cha力度是保证结果准确性de可kao方法,比ru对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdeng项目de可疑、弱阳性biao本ji少jian模式de检测结果进行复cha。

si、结果判断和报告常用下列ji种方法表示结果:

1.定性测定

2.半定liang测定 结果yi般yi滴度表蔶inⅫ/span>

3.定liang测定 即用已知liangdebiao准pin作yi系列稀释hou进行ELISA测定,绘制biao准曲线,结果yi优良liang或单位表蔶inaiELISA定liang检测中每yi块反应板都必须绘制相应debiao准曲线。

zhu意事项:

zixiyue秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检cha试剂盒biao签上de有效期。ru果超过有效期,请勿shi用。

an说明书确定suo有试剂齐全(数liang、体ji)。

biao本制备yao规范,每份biao本体jiyaoan2-3个复孔yi上deliang制备(zhucun),jinliangfen装做备份。短期内无法实验者,zhu意低温保cun。

准备haosuo有实验额外suo需物pin,(比ruyi液器,试管,清洗器,酶biao仪)。

an说明书jiangsuo用试剂平衡至室温,根据检测biao本数liang确定suo需试剂deliang。

检cha试剂簒in诿恐zhi约羋ezhucun条件,保证suo有试剂均an照试剂簒in谒得魇閠ui荐de条件cun储。

检cha不wen定或者变zhide试剂溶液(比ru沉淀或变se)。有些试糽i萺ubiao准pin稀释液或者检测稀释液,可能zai设计时就含有沉淀物。suo有试剂zai祑en朊竍iao板zhiqian,必需充fen混詑u6蓎u沉淀物de特性,zai加入酶biao板zhiqian,必需不停搅拌。

保证充fendefu育时jian和温秖uⅫ/span>

qie勿shi用不tong生产批号de试剂qu代现有试剂或混合现有试剂。

zai混合或溶解蛋白溶液时,避mian泡沫产生。

zai实验开shizhiqian,安paihao实验liu程。

zai实验开shizhiqian,清洁gong作台。

若有问题,应yu我公司或代理商de技术支持联系

人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒结果判断:

1. 每个biao准pindeOD值减去空白孔deOD值hou作图,ru设置复孔,则应qu其平均值计算。yibiao准pinde浓度wei横坐biao,OD值wei纵坐biao,绘chubiao准曲线。亦可yiOD值wei横坐biao,biao准pinde浓度wei纵坐biao,绘chubiao准曲线。

2. tui荐shi用zhuan业de曲线制作软件,rucurve expert 1.31.4,zai软件界面既可根据样pinOD值,由biao准曲线chachu相应de浓度,乘yi稀释倍数ui嗫蒵iang样pindeOD值代入biao准曲线de拟合方程式,计算chu样pin浓度,再乘yi稀释倍数,即wei样pinde实际浓秖uⅫ/span>

3. 若样pinOD值高yubiao准曲线上限,应适当稀释houzhong测,计算浓度时应乘yi稀释倍数。 

封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒有效期wen定性考察

本试验yi封闭蛋白5(CLDN5)wei例

1.        OD值:

正常保cun条件下有效期内和超过有效期2个yuesuo测OD值比较

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个yue有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.hui收率:fen别yu定值血清ji血浆中加入yi定liangde封闭蛋白5(CLDN5)biao准pin,zhong复测定并计算其pin均值,hui收率wei测定值yu理论值de比率。

        正常保cun条件下有效期内和过有效期2个yueelisa 试剂盒hui收聅hi觳饨峁?/span>

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:fen别yu定值血清ji血浆中加入yi定liangde封闭蛋白5(CLDN5)biao准pin,并jiangbiao本an1:2,1:4,1:8稀释,线性范围即wei稀释hou样本中封闭蛋白5(CLDN5)含liangde测定值yu理论值de比率。

         正常保cun条件下有效期内和过有效期2个yueelisa 试剂盒hui线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:yi样pin测定值de变异系数CV表蔶inⅫ/span>CV%=SD/meanx100

批内差:qutongyi批次试剂盒对低值,中值和高值样本进行定liang检测,每份样眏ing舛?/span>20次,fen别计算不tong浓度样本de平均值和SD值。

批jian差:选qu 3 个不tong批次de试剂盒fen别对低、中、高值定值样本进行定liang测定, 每个样本shi用tongyi试剂盒zhong复测定 8 次,fen别计算不tong浓度样本de平均值ji SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正常保cun条件下有效期内和过有效期2个yueelisa 试剂盒hui精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人封闭蛋白5(CLDN5)试剂盒会chu现de问题ji解决办法:

1. 加入反应zhong止液hou,没有xi光值或xi光值偏低。

a.yuan因:未加入酶biao记物。

解决办法:请an照操作bu骤进行。

b.yuan因:试剂簒in谌菸镂茨艹鋐enhui。

解决办法:确定试剂簒in谌菸飄ui温hou再进行操作。

c.yuan因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请yu操作bu骤4,适当延长温育时jian。

d.yuan因:未shi用试剂盒de清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂簒in趕uo提gongde清洗液清洗。

e.yuan因:试剂盒已过有效期限。

解决办法:请geng换成仍zai有效期限内de试剂盒。

2. biao准曲线线性不佳,或是平行性不hao。

a.yuan因:温育位置避光不hao或受到qiliu干扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(ru抽屉内)

b.yuan因:操作时jian拖太久。

解决办法:请zai方法熟练hou再进行操作。

c.yuan因:微孔jian相hu污萰inⅫ/span>

解决办法: 加样pin时,请小xin勿溅chu微孔外,yimian造成其它微孔de污萰inⅫ/span>

d.yuan因:biao准pin或酶biao记物suo加入deliang不yi致。

解决办法:请shi用已校正过deyi液枪,并确保其yuxi头zhijian有高度密合性。

e.yuan因:添加样pin或试剂de操作方法不正确。

解决办法:加样pin或试剂时,xi头请勿jie触微孔。

f.yuan因:洗板过程发生问题(ru管lu堵塞、洗完板hou未立刻进行下yibu骤)

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完hou立即进行下yibu骤。

3. xi光值均偏高(或线性不gou陡)

a.yuan因:室温太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短bu骤4de温育时jian。

b.yuan因:底物溶液受到污萰inⅫ/span>

解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝se,请瞙ui賡hi用。

c.yuan因:反应时jian超过太久。

解决办法:请控謕in从κ眏ian。

d.yuan因ao竍iao记物污染liao簒in谄渌约痢Ⅻ/span>

解决办法:shi用过dexi头应立即丢弃,可避mian试剂jian相hu污染,凡是试剂(特别是酶biao记物yu底物溶液)jie触过de容器应立即清洗干净。(先yi漂白水浸泡,再yi清水chong洗干净,可确保无残留)

4. 阴性biao准pindexi光值低yu阳性biao准pindexi光值。

a.yuan因:微孔中de试剂未能充fen混合。

解决办法: 试剂加完hou,需轻敲盘sizhoushi其充fen混合均詑uⅫ/span>

b.yuan因:洗板过程发生问题(tong2-f.)

解决办法:请can考2-f.

c.yuan因:添加样pin或酶biao记物deliang不yi致。

解决办法: 请can考2-d.

 

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