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renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒

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bbin注册名称: renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒
bbin注册型号: α1-AGP
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renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒  的详细介绍


renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒

使用shuo明书

renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒基本原理:

本试剂盒采用双bbin网址紉ing腅LISA法。用抗renα1-AGPbbin网址包被于酶标板上,实验时样品或标准苀en械膔enα1-AGP与包被bbin网址结合,游离的成fen被洗qu。依次加入生物素化的抗renα1-AGPbbin网址和辣根guo氧化物酶标记的亲和素。抗renα1-AGPbbin网址与结合在包被bbin网址上的renα1-AGP结合、生物素与亲和素特yi性结合而形成**复合物,游离的成fen被洗qu。加入显色底物(TMB),TMB在辣根guo氧化物酶的cui化下呈xianlan色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nmbochang处ceOD值,renα1-AGP浓du与OD450值之jian呈正比,通guo绘制标准曲线计算chu样苀en衦enα1-AGP的浓du。

renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒miao述:

英文名称 Human α1-AGP (Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit
zhong文名称 renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)酶联**吸附ce定试剂盒
货号 X-EL-H0001c 种属 Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双bbin网址紉ing姆?/span>
检ce范围 3.125~200ng/mL 灵敏du 1.875ng/mL

试剂盒zu成:

zhong文名称

英文名称

规格

baocun

  ELISA酶标板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化bbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化bbin网址稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗di液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fu膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册shuo明书

Product  Description

  1 

 

质检报gao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuo明
*: [96T/48T](打开包装后请ji时检查所有物品shi否qi全完整)
#: 
一周内使用可cun于4℃,需chang时jiancun放或多次使用jian议cun于-20.                                      

renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒检ce前准备工作:

1. 请提前20fen钟从冰箱zhong取chu试剂盒,ping衡至室温。

2. jiang浓缩洗di液用双蒸水稀释(1:25)。wei用完的放回4℃。从冰箱zhong取chu的浓缩洗di液可能有结jing,属于正常xian象,可用40℃水浴微加re使结jing完全溶解后再pei制洗di液(加re温du瞙ui琯uo50℃,使用时洗di液应为室温)。当日使用。

3. 标准品10000×g离心1fen钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至dong干标准苀en校艄芨牵仓曼/span>10fen钟,上下颠倒数次,待其充fen溶解后,用移液器jiang其qingqing混匀(浓du为8000pg/mL)。然后根ju需要进xing倍比稀释(注:瞙ui苯釉诜从ongzhong进xing倍比稀释)。jian议pei制成以下浓du:按照稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白kong0ng/mL。如pei制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入han有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管zhong,混匀ji可,其余浓du依此lei推。 

4. 生物素化bbin网址工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/kong计),实际pei制时应多pei制100-200μL。使觤en?/span>15fen钟,以生物素化bbin网址稀释液稀释浓缩生物素化bbin网址(1:100)成工作浓du。当日使用。

5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/kong计),实际pei制时应多pei制100-200μL。使觤en?/span>15fen钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓du。

当日使用。

renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,ye可根ju实际用量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各kongzhong加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90fen钟

2. 加入100μ生物素化bbin网址工作液,37℃孵育60fen钟

3. 洗di3

4. 加入100μL酶结合物工作液, 37℃孵育30fen钟

5. 洗di5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15fen钟zuo右

7. 加入50μL终止液,立ji在450nmbochang处ce量OD

8. 结果计算

一、操作yin素对ELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作不当jiang引起jiao大的误差。以下叙述各个步骤zhong的影响yin素。

1.加样

2.温育

3.洗di

4.显色

5.比色

二、huiqu的设置通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报gao结果,两zhejian有一条fen界线被称为“阳性判duan值ao?/span>cut-off valueCO值),这shi定性**ce定结果报gao的依ju。

三、标本复查ELISAshou工检ceguo程复杂,影响yin素jiao多,ji使室内质控在控,ye可能yinkongjian差yi而造成结果的差yi,yin此加大复查力dushibaozheng结果准确性的可靠方法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等xiang目的可疑、ruo阳性标本ji少见mo式的检ce结果进xing复查。

四、结果判duan和报gao常用下列几种方法表shi结果:

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果一般以滴du表shi。

3.定量ce定 ji用已知量的标准品作一系列稀释后进xingELISAce定,绘制标准曲线,结果以优liang量或单wei表shi。在ELISA定羕ao靋ezhong每一kuai反应板都必须绘制相应的标准曲线。

注意事xiang:

仔细阅dushuo明书。

检查试剂盒标qian上的有xiaoqi。如果超guo有xiaoqi,请勿使用。

按shuo明书确定所有试剂qi全(数量、体积)。

标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复kong以上的量制备(贮cun),尽量fen装zuo备份。短qi内无法实验zhe,注意低温baocun。

准备好所有实验额外所需物品,(眗e缫埔浩鳎怨埽逑雌鳎副暌牵Ⅻ/span>

按shuo明书jiang所用试剂ping衡至室温,根ju检ce标本数量确定所需试剂的量。

检查试剂盒内每种试剂的贮cun条jian,baozheng所有试剂均按照试剂盒内shuo明书推荐的条jiancunchu。

检查不稳定或zhe变质的试剂溶液(眗e绯恋砘虮渖Sxing┦约粒re绫曜计废∈鸵夯騴he检ce稀释液,可能在设计时就han有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之前,必需充fen混匀。而you于沉淀物的特性,在加入酶标板之前,必需不停搅拌。

baozheng充fen的孵育时jian和温du。

切勿使用不同生产批号的试剂取代xian有试剂或混合xian有试剂。

在混合或溶解蛋白溶液蔮ao苊馀菽Ⅻ/span>

在实验开始之前,癱ai藕檬笛榱鞒獭Ⅻ/span>

在实验开始之前,清洁工作tai。

若有问题,应与我gong司或代理shang的技术支chi联系

renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒结果判duan:

1. 每个标准品的OD值减qu空白kong的OD值后作图,如设置复kong,ze应取其ping均值计算。以标准品的浓du为横zuo标,OD值为zongzuo标,绘chu标准曲线。亦可以OD值为横zuo标,标准品的浓du为zongzuo标,绘chu标准曲线。

2. 推荐使用专ye的曲线制作ruanjian,如curve expert 1.31.4,在ruanjian界面既可根ju样品OD值,you标准曲线查chu相应的浓du,cheng以稀释倍数ui嗫蒵iang样品的OD值代入标准曲线的ni合方程式,计算chu样品浓du,再cheng以稀释倍数,ji为样品的实际浓du。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重ce,计算浓du时应cheng以稀释倍数。 

renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒有xiaoqi稳定性kao察

本试验以α1酸性tang蛋白(α1-AGP)为例

1.        OD值:

正常baocun条jian下有xiaoqi内和超guo有xiaoqi2个yue所ceOD值比jiao

正常有xiaoqi内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2个yue有xiaoqiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:fen别于定值血清ji血浆zhong加入一定量的α1酸性tang蛋白(α1-AGP)标准品,重复ce定并计算其品均值,回收率为ce定謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻ/span>

        正常baocun条jian下有xiaoqi内和guo有xiaoqi2个yueelisa 试剂盒回收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:fen别于定值血清ji血浆zhong加入一定量的α1酸性tang蛋白(α1-AGP)标准品,并jiang标本按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围ji为稀释后样本zhongα1酸性tang蛋白(α1-AGP)han量的ce定謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻ/span>

         正常baocun条jian下有xiaoqi内和guo有xiaoqi2个yueelisa 试剂盒回线性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        jing密du:以样品ce定值的变yi系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次试剂盒对低值,zhong值和高值样本进xing定羕ao靋e,每份样本ce定20次,fen别计算不同浓du样本的ping均值和SD值。

批jian差:选取 3 个不同批次的试剂盒fen别对低、zhong、高值定值样本进xing定量ce定, 每个样本使用同一试剂盒重复ce定 8 次,fen别计算不同浓du样本的ping均值ji SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正常baocun条jian下有xiaoqi内和guo有xiaoqi2个yueelisa 试剂盒回jing密du检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

renα1酸性tang蛋白(α1-AGP)试剂盒会chuxian的问题ji解决办法:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原yin:wei加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进xing。

b.原yin:试剂盒内容物wei能充fen回。

解决办法:确定试剂盒内容物回温后再进xing操作。

c.原yin:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请于操作步骤4,适当延chang温育时jian。

d.原yin:wei使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原yin:试剂盒已guo有xiaoqi限。

解决办法:请更换成仍在有xiaoqi限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不jia,或shipingxing性不好。

a.原yin:温育wei置避光不好或shoudao气流干扰。

解决办法: 请确认温育wei置既不透光ye不透风(如chouti内)

b.原yin:操作时jian拖太jiu。

解决办法:请在方法shu练后再进xing操作。

c.原yin:微kongjian相互wu染。

解决办法: 加样品蔮ao胄⌒奈鸾hu微kong外,以免造成其ta微kong的wu染。

d.原yin:标准品或酶标记物所加入的量瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解决办法:请使用已校正guo的移液枪,并确bao其与吸蚮en甹ian有高du密合性。

e.原yin:添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂蔮ao非胛鸾哟ノong。

f.原yin:洗板guo程fa生问题(如管路du塞、洗完板后wei立刻进xing下一步骤)

解决办法:请随时监控洗板机洗板guo程,洗完后立ji进xing下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)

a.原yin:室温太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内温du,请适当缩短步骤4的温育时jian。

b.原yin:底物溶液shoudaowu染。

解决办法: 若faxian底物溶液已呈xian淡lan色,请瞙ui偈褂谩Ⅻ/span>

c.原yin:反应时jian超guo太jiu。

解决办法:请控制反应时jian。

d.原yin:酶标记物wu染了盒内其ta试剂。

解决办法:使用guo的吸头应立ji丢弃,可避免试糽iang湎嗷u染,凡shi试剂(特别shi酶标记物与底物溶液)接触guo的容器应立ji清洗干净。(xian以piao白水jin泡,再以清水冲洗干净,可确bao无残留)

4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原yin:微kongzhong的试剂wei能充fen混合。

解决办法: 试糽iang油旰螅鑡ing敲盘四周使其充fen混合均匀。

b.原yin:洗板guo程fa生问题(2-f.)

解决办法:请参kao2-f.

c.原yin:添加样品或酶标记物的量瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解决办法: 请参kao2-d.