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人降钙素(CT)试ji盒

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简单jie绍

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人降钙素(CT)试ji盒  dexiangxijie绍


人降钙素(CT)试ji盒

shiyong说明书

人降钙素(CT)试ji盒基本yuanli:

本试ji盒采yong双bbin网址夹心ELISA法。yong抗人CTbbin网址包被yumeibiao板上,实yan时样品huobiao准苀en衐e人CT与包被bbin网址结合,youlide成穤hi粁i去。依次加入sheng物素化de抗人CTbbin网址和辣根guoyang化物meibiao记de亲和素。抗人CTbbin网址与结合在包被bbin网址上de人CT结合、sheng物素与亲和素te异性结合而xing成**复合物,youlide成穤hi粁i去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根guoyang化物meide催化下呈xian蓝色,加终止液后变成黄色。yongmeibiao仪在450nm波changchu测ODzhi,人CT浓du与OD450zhi之jian呈zheng比,通guo绘zhibiao准曲线计suan出样苀en腥薈Tde浓du

人降钙素(CT)试ji盒描shu:

英文名chen Human CT (Calcitonin) ELISA Kit
謝ing拿鹀hen 人降钙素(CT)meilian**吸附测ding试ji盒
货号 X-EL-H0136c 种shu Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双bbin网址夹心法
检测范围 15.625~1000pg/mL 灵敏du 9.375pg/mL

试ji盒组成:

謝ing拿鹀hen

英文名chen

规格

bao存

  ELISAmeibiao板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻ganbiao准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准品&样品稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物素化bbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化bbin网址稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

mei结合物稀shi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fu膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

te别说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查suo觴ing锲肥欠衿肴暾?/span>
#: 
一周内shiyongke存yu4℃,需chang时jian存放huo多次shiyong建议存yu-20.                                      

人降钙素(CT)试ji盒检测前准备工作:

1. 请提前20fen钟从冰箱中取出试ji盒,平衡至室温。

2. 将浓缩xi涤液yong双蒸水稀shi(1:25)。未yong完de放回4℃。从冰箱中取出de浓缩xi涤液kenengyou结晶,shuyuzheng常xian象,keyong40℃水浴微加reshi结晶完全溶解后zaipeizhixi涤液(加re温du不要超guo50℃,shiyong时xi涤液应为室温)。dang日shiyong。

3. biao准品yu10000×gli心1fen钟,加入biao准品&样品稀shi液1.0mL至冻ganbiao准苀en校艄芨牵仓曼/span>10fen钟,上下dian倒shu次,待其充fen溶解后,yong移液器将其qingqing混匀(浓du为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀shi(注:不要zhi接在反应孔中进行倍比稀shi)。建议peizhi成以下浓du:按照稀shi方法图例 biao准品&样品稀shi液zhi接作为空白孔0ng/mL。rupeizhi5ng/mLbiao准品:取0.5mL10ng/mLde上shubiao准品加入含you0.5mLbiao准品&样品稀shi液deEP管中,混匀jike,其余浓du依此lei推。 

4. sheng物素化bbin网址工作液:实yan前计suandang次实yansuo需yong量(以100μL/孔计),实际peizhi时应多peizhi100-200μL。shiyong前15fen钟,以sheng物素化bbin网址稀shi液稀shi浓缩sheng物素化bbin网址(1:100)成工作浓du。dang日shiyong。

5. mei结合物工作液:实yan前计suandang次实yansuo需yong量(以100μL/孔计),实际peizhi时应多peizhi100-200μL。shiyong前15fen钟,以mei结合物稀shi液稀shi浓缩HRPmei结合物(1:100)成工作浓du。

dang日shiyong。

人降钙素(CT)试ji盒biao准品稀shi方法图例:(以500μL/管为例,也ke根据实际yong量来稀shi,ru200μL/管)

            

1. 在各孔中加入biao准品huo样品各100μL 37℃孵育90fen钟

2. 加入100μsheng物素化bbin网址工作液,37℃孵育60fen钟

3. xi涤3

4. 加入100μLmei结合物工作液, 37℃孵育30fen钟

5. xi涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15fen钟zuo右

7. 加入50μL终止液,立ji在450nm波changchu测量ODzhi

8. 结guo计suan

一、操作因素对ELISA结guodeying响ELISA操作步zhou复杂,操作不dang将引起絰i骴e误差。以下叙shu各ge步zhou中deying响因素。

1.加样

2.温育

3.xi涤

4.显色

5.比色

二、灰qude设置通常情况下,ELISAding性实yan以“阳性”和“阴性”来报告结guo,两者jianyou一条fen界线被chen为“阳性判断zhiao?/span>cut-off valueCOzhi),zhe是ding性**测ding结guo报告de依据。

三、biao本复查ELISA手工检测guo程复杂,ying响因素较多,jishi室内质控在控,也keneng因孔jian差异而造成结guode差异,因此加大复查力du是bao证结guo准que性deke靠方法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目deke疑、弱阳性biao本及少见模shide检测结guo进行复查。

si、结guo判断和报告常yong下列ji种方法表示结guo:

1.ding性测ding

2.半ding量测ding 结guo一般以滴du表蔶inⅫ/span>

3.ding量测ding jiyong已zhi量debiao准品作一系列稀shi后进行ELISA测ding,绘zhibiao准曲线,结guo以优羓i縣uo单位表蔶inT冱/span>ELISAding量检测中每一块反应板都必须绘zhi相应debiao准曲线。

注意事项:

仔xiyue读说明书。

检查试ji盒biao签上deyou效期。ruguo超guoyou效期,请勿shiyong。

按说明书quedingsuoyou试ji齐全(shu量、体积)。

biao本zhi备要规范,每份biao本体积要按2-3ge复孔以上de量zhi备(贮存),jin量穤hong白霰阜荨uan期内无法实yan者,注意di温bao存。

准备好suoyou实yan额外suo需物品,(眗e缫埔浩鳎怨埽鍃i器,meibiao仪)。

按说明书将suoyong试ji平衡至室温,根据检测biao本shu量quedingsuo需试jide量。

检查试ji盒内每种试jide贮存条件,bao证suoyou试jijun按照试ji盒内说明书推jiande条件存chu。

检查不稳dinghuo者变质de试ji溶液(眗e绯恋韍uo变色)。youxie试ji,眗e鏱iao准品稀shi液huo者检测稀shi液,keneng在设计时就含you沉淀物。suoyou试ji在滴入meibiao板之前,必需充fen混匀。而youyu沉淀物dete性,在加入meibiao板之前,必需不停jiao拌。

bao证充穤hi姆跤眏ian和温du。

莤ing餾hiyong不tongshengchan批号de试ji取代xianyou试jihuo混合xianyou试ji。

在混合huo溶解蛋白溶液蔮ao躮ianpao沫chansheng。

在实yan开始之前,安排好实yan流程。

在实yan开始之前,清洁工作台。

若觴ing侍猓τ胛夜緃uo代lishangde技shu支chilian系

人降钙素(CT)试ji盒结guo判断:

1. 每gebiao准品deODzhijian去空白孔deODzhi后作图,ru设謒ei纯祝蛴θ∑淦絡unzhi计suan。以biao准品de浓du为横坐biao,ODzhi为zong坐biao,绘出biao准曲线。亦ke以ODzhi为横坐biao,biao准品de浓du为zong坐biao,绘出biao准曲线。

2. 推jianshiyong专业de曲线zhi作软件,rucurve expert 1.3huo1.4,在软件界面jike根据样品ODzhi,youbiao准曲线查出相应de浓du,乘以稀shi倍shu;亦ke将样品deODzhi代入biao准曲线de拟合方程shi,计suan出样品浓du,zai乘以稀shi倍shu,ji为样品de实际浓du。

3. 若样品ODzhigaoyubiao准曲线上限,应shidang稀shi后重测,计suan浓du时应乘以稀shi倍shu。 

降钙素(CT)试ji盒you效期稳ding性考察

本试yan以降钙素(CT)为例

1.        ODzhi:

zheng常bao存条件下you效期内和超guoyou效期2ge月suo测ODzhi比较

zheng常you效期内ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2ge月you效期ODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:穤hi饄udingzhi血清及血浆中加入一ding量de降钙素(CT)biao准品,重复测ding并计suan其品junzhi,回收率为测dingzhi与li论zhide比率。

        zheng常bao存条件下you效期内和guoyou效期2ge月elisa 试ji盒回收率检测结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:穤hi饄udingzhi血清及血浆中加入一ding量de降钙素(CT)biao准品,并将biao本按1:2,1:4,1:8稀shi,线性范围ji为稀shi后样本中降钙素(CT)含量de测dingzhi与li论zhide比率。

         zheng常bao存条件下you效期内和guoyou效期2ge月elisa 试ji盒回线性检测结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密du:以样苀an鈊ingzhide变异系shuCV表蔶inⅫ/span>CV%=SD/meanx100

批内差:取tong一批次试ji盒对dizhi,中zhi和gaozhi样本进行ding量检测,每份样本测ding20次,穤hi鸺苨uan不tong浓du样本de平junzhi和SDzhi。

批jian差:xuan取 3 ge不tong批次de试ji盒穤hi鸲詃i、中、gaozhidingzhi样本进行ding量测ding, 每ge样本shiyongtong一试ji盒重复测ding 8 次,穤hi鸺苨uan不tong浓du样本de平junzhi及 SD zhi。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       zheng常bao存条件下you效期内和guoyou效期2ge月elisa 试ji盒回精密du检测结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人降钙素(CT)试ji盒会出蟴hi奈侍饧敖饩霭旆ǎ裹/span>

1. 加入反应终止液后,没觴ing鈠hihuo吸光zhi偏di。

a.yuan因:未加入meibiao记物。

解决办法:请按照操作步zhou进行。

b.yuan因:试ji盒内rong物未neng充fen回。

解决办法:queding试ji盒内rong物回温后zai进行操作。

c.yuan因:室温taidi。

解决办法:若室温taidi(<19),请yu操作步zhou4,shidang延chang温育时jian。

d.yuan因:未shiyong试ji盒de清xi液清xi。

解决办法: 请yong试ji盒内suo提供de清xi液清xi。

e.yuan因:试ji盒已guoyou效期限。

解决办法:请更换成仍在you效期限内de试ji盒。

2. biao准曲线线性不佳,huo是平行性不好。

a.yuan因:温育位置避光不好huoshou到气流gan扰。

解决办法: 请que认温育位置ji不tou光也不tou风(ru抽屉内)

b.yuan因:操作时jiantuotaijiu。

解决办法:请在方法熟练后zai进行操作。

c.yuan因:微孔jian相互污萰inⅫ/span>

解决办法: 加样品蔮ao胄⌒奈鸾Τ鑫⒖淄猓詍ian造成其它微孔de污萰inⅫ/span>

d.yuan因:biao准品huomeibiao记物suo加入de量不一致。

解决办法:请shiyong已校zhengguode移液枪,并quebao其与吸蚮en甹ianyougaodu密合性。

e.yuan因:添加样品huo试jide操作方法不zhengque。

解决办法:加样品huo试ji蔮ao非胛鸾哟ノ⒖住Ⅻ/span>

f.yuan因:xi板guo程发sheng问题(ru管路dusai、xi完板后未立刻进行下一步zhou)

解决办法:请随时监控xi板机xi板guo程,xi完后立ji进行下一步zhou。

3. 吸光zhijun偏gao(huo线性不够陡)

a.yuan因:室温taigao(>25)

解决办法: 若无法降di室内温du,请shidang缩duan步zhou4de温育时jian。

b.yuan因:底物溶液shou到污萰inⅫ/span>

解决办法: 若发蟴hi孜锶芤阂殉氏zhi渡氩灰獄aishiyong。

c.yuan因:反应时jian超guotaijiu。

解决办法:请控zhi反应时jian。

d.yuan因:meibiao记物污ran了盒内其它试ji。

解决办法:shiyongguode吸头应立ji丢弃,ke避mian试jijian相互污ran,fan是试ji(te别是meibiao记物与底物溶液)接触guoderong器应立ji清xigan净。(先以漂白水浸pao,zai以清水冲xigan净,kequebao无canliu)

4. 阴性biao准品de吸光zhidiyu阳性biao准品de吸光zhi。

a.yuan因:微孔中de试ji未neng充fen混合。

解决办法: 试ji加完后,需qing敲盘si周shi其充fen混合jun匀。

b.yuan因:xi板guo程发sheng问题(tong2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.yuan因:添加样品huomeibiao记物de量不一致。

解决办法: 请参考2-d.

 

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