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人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe

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bbinzhu册名称: 人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe
bbinzhu册型hao: CSTA
bbinzhu册zhanshang: ELISAshijihe
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人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe  的详细jieshao


人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe

shi用shuo明书

人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe基benyuan理:

benshijihecai用shuangbbin网址夹xinELISA法。用抗人CSTAbbin网址包被于酶标板上,实yan时yangpin或标准pin中的人CSTA与包被bbin网址jie合,游离的成分被洗qu。依次加ru生物素化的抗人CSTAbbin网址he辣根过氧化物酶标记的qinhe素。抗人CSTAbbin网址与jie合zai包被bbin网址上的人CSTAjie合、生物素与qinhe素特yi性jie合而形成**复合物,游离的成分被洗qu。加ru显色di物(TMB),TMBzai辣根过氧化物酶的催化xia呈xianlan色,加终止液后变成huang色。用酶标yizai450nm波changchuceOD值,人CSTA浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出yangpin中人CSTA的浓度。

人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe描shu:

ying文名称 Human CSTA (Cystatin A)  ELISA Kit
中文名称 人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)酶联**xi附cedingshijihe
货hao X-EL-H0147c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 shuangbbin网址夹xin法
检ce范围 0.313~20ng/mL 灵敏度 0.188ng/mL

shijihezu成:

中文名称

ying文名称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标准pin

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准pin&yangpin稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化bbin网址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化bbin网址稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶jie合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(bi光)

酶jie合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

di物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(bi光)

fanying终止液

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbinzhu册shuo明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuo明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物pinshi否qi全完zheng)
#: 
一周内shi用可存于4℃,需chang时间存fang或多次shi用建议存于-20.                                      

人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe检ceqian准备工作:

1. 请提qian20分钟从冰箱中取出shijihe,平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用shuang蒸水稀释(1:25)。未用完的fang回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有jie晶,属于正常xian象,可用40℃水浴wei加热shijie晶完全溶解后zai配制洗涤液(加热温度bu要超过50℃,shi用时洗涤液ying为室温)。当日shi用。

3. 标准pin10000×g离xin1分钟,加ru标准pin&yangpin稀释液1.0mL至dong干标准pin中,旋紧guan盖,jing置10分钟,上xia颠倒数次,待其chong分溶解后,用移液器将其轻轻混yun(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀蕋ing▃hu:bu要直接zaifanying孔中进行倍比稀蕋ing=ㄒ榕渲瞥梢詘ia浓度:an照稀蕋ou椒ㄍ祭?/span> 标准pin&yangpin稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准pin:取0.5mL10ng/mL的上shu标准pin加ru含有0.5mL标准pin&yangpin稀释液的EPguan中,混yun即可,其余浓度依此类推。 

4. 生物素化bbin网址工作液:实yanqian计算当次实yan所需用量(以100μL/孔计),实际配制时ying多配制100-200μL。shi用qian15分钟,以生物素化bbin网址稀释液稀释浓缩生物素化bbin网址(1:100)成工作浓度。当日shi用。

5. 酶jie合物工作液:实yanqian计算当次实yan所需用量(以100μL/孔计),实际配制时ying多配制100-200μL。shi用qian15分钟,以酶jie合物稀释液稀释浓缩HRP酶jie合物(1:100)成工作浓度。

当日shi用。

人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe标准pin稀蕋ou椒ㄍ祭海ㄒ狱/span>500μL/guan为例,也可根据实际用量来稀蕋ing纥/span>200μL/guan)

            

1. zaige孔中加ru标准pin或yangpinge100μL 37℃孵育90分钟

2. 加ru100μ生物素化bbin网址工作液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加ru100μL酶jie合物工作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加ru90μLdi物溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加ru50μL终止液,立即zai450nm波changchuce量OD

8. jieguo计算

一、操作因素对ELISAjieguo的yingxiangELISA操作步骤复杂,操作bu当将引qi较da的误差。以xia叙shuge个步骤中的yingxiang因素。

1.加yang

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、粂i纳柚猛ǔG榭鰔ia,ELISAding性实yan以“yang性”he“阴性”来报告jieguo,两者间有一条分界线被称为“yang性判秞ian怠保?/span>cut-off valueCO值),这shiding性**cedingjieguo报告的依据。

三、标ben复查ELISAshou工检ce过程复杂,yingxiang因素较多,即shi室内质kongzaikong,也可能因孔间差yi而造成jieguo的差yi,因此加da复查力度shi保证jieguo准确性的可kao方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdeng项目的可疑、弱yang性标ben及少见mo式的检cejieguo进行复查。

四、jieguo判断he报告常用xialie几种方法表示jieguo:

1.ding性ceding

2.半ding量ceding jieguo一ban以滴度表示。

3.ding量ceding 即用已zhi量的标准pin作一系lie稀释后进行ELISAceding,绘制标准曲线,jieguo以you羓i炕虻ノ槐硎尽aiELISAding量检ce中每一块fanying板都必须绘制相ying的标准曲线。

zhu意事项:

仔细阅读shuo明书。

检查shijihe标签上的有效期。如guo超过有效期,请勿shi用。

anshuo明书确ding所有shijiqi全(数量、体积)。

标ben制备要规范,每份标ben体积要an2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装zuo备份。短期内wu法实yan者,zhu意低温保存。

准备hao所有实yan额外所需物pin,(比如移液器,shiguan,清洗器,酶标yi)。

anshuo明书将所用shiji平衡至室温,根据检ce标ben数量确ding所需shiji的量。

检查shiji簒in诿恐謘hiji的贮存条jian,保证所有shiji均an照shiji簒in趕huo明书推荐的条jian存储。

检查bu稳ding或者变质的shiji溶液(比如沉淀或变色)。有xieshiji,比如标准pin稀释液或者检ce稀释液,可能zai设计蔮en秃谐恋砦铩K衧hijizai滴ru酶标板之qian,必需chong分混yun。而you于沉淀物的特性,zai加ru酶标板之qian,必需butingjiao拌。

保证chong分的孵育时间he温度。

qie勿shi用bu同生产批hao的shiji取代xian有shiji或混合xian有shiji。

zai混合或溶解蛋白溶液时,bi免泡沫产生。

zai实yan开始之qian,安排hao实yan流程。

zai实yan开始之qian,清jie工作台。

若有问题,ying与我公司或代理shang的技shuzhi持联系

人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihejieguo判断:

1. 每个标准pin的OD值减qu空白孔的OD值后作图,如设置复孔,则ying取其平均值计算。以标准pin的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准pin的浓度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐shi用专ye的曲线制作软jian,如curve expert 1.31.4,zai软jian界面既可根据yangpinOD值,you标准曲线查出相ying的浓度,cheng以稀释倍数ui嗫山珁angpin的OD值代ru标准曲线的拟合方程式,计算出yang苀angǘ龋瑉aicheng以稀释倍数,即为yangpin的实际浓度。

3. 若yangpinOD值gao于标准曲线上xian,ying适当稀释后重ce,计算浓度时yingcheng以稀释倍数。 

半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe有效期稳ding性考察

benshiyan以半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)为例

1.        OD值:

正常保存条jianxia有效期内he超过有效期2个月所ceOD值比较

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于ding值血清及血jiang中加ru一ding量的半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)标准pin,重复ceding并计算其pin均值,回收率为ceding值与理论值的比率。

        正常保存条jianxia有效期内he过有效期2个月elisa shijihe回收率检cejieguo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分别于ding值血清及血jiang中加ru一ding量的半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)标准pin,并将标benan1:2,1:4,1:8稀蕋ing咝苑段Ъ次∈秃髖angben中半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)含量的ceding值与理论值的比率。

         正常保存条jianxia有效期内he过有效期2个月elisa shijihe回线性检cejieguo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以yangpinceding值的变yi系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次shijihe对低值,中值hegao值yangben进行ding量检ce,每份yangbenceding20次,分别计算bu同浓度yangben的平均值heSD值。

批间差:选取 3 个bu同批次的shijihe分别对低、中、gao值ding值yangben进行ding量ceding, 每个yangbenshi用同一shijihe重复ceding 8 次,分别计算bu同浓度yangben的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存条jianxia有效期内he过有效期2个月elisa shijihe回精密度检cejieguo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人半guang氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)shijihe会出xian的问题及解决办法:

1. 加rufanying终止液后,mei有xi光值或xi光值偏低。

a.yuan因:未加ru酶标记物。

解决办法:请an照操作步骤进行。

b.yuan因:shiji簒in谌菸镂茨躢hong分回。

解决办法:确dingshiji簒in谌菸锘匚潞髗ai进行操作。

c.yuan因:室温tai低。

解决办法:若室温tai低(<19),请于操作步骤4,适当延chang温育时间。

d.yuan因:未shi用shijihe的清洗液清洗。

解决办法: 请用shiji簒in谒峁┑那逑匆呵逑础Ⅻ/span>

e.yuan因:shijihe已过有效期xian。

解决办法:请更换成仍zai有效期xian内的shijihe。

2. 标准曲线线性bu佳,或shi平行性buhao。

a.yuan因:温育位置bi光bu簃ei蚴艿狡鞲扇拧Ⅻ/span>

解决办法: 请确认温育位置既bu透光也bu透风(如抽屉内)

b.yuan因:操作时间拖tai久。

解决办法:请zai方法熟lian后zai进行操作。

c.yuan因:wei孔间相互污ran。

解决办法: 加yangpin时,请小xin勿溅出wei孔外,以免造成其它wei孔的污ran。

d.yuan因:标准pin或酶标记物所加ru的量bu一致。

解决办法:请shi用已校正过的移液枪,并确保其与xitou之间有gao度密合性。

e.yuan因:添加yangpin或shiji的操作方法bu正确。

解决办法:加yangpin或shiji时,xitou请勿接触wei孔。

f.yuan因:洗板过程发生问题(如guan路堵塞、洗完板后未立刻进行xia一步骤)

解决办法:请随时监kong洗板ji洗板过程,洗完后立即进行xia一步骤。

3. xi光值均偏gao(或线性bu够dou)

a.yuan因:室温taigao(>25)

解决办法: 若wu法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。

b.yuan因:di物溶液受到污ran。

解决办法: 若发xiandi物溶液已呈xiandanlan色,请bu要zaishi用。

c.yuan因:fanying时间超过tai久。

解决办法:请kong制fanying时间。

d.yuan因ao副昙俏镂踨an了簒in谄渌黶hiji。

解决办法:shi用过的xitouying立即ding弃,可bi免shiji间相互污ran,凡shishiji(特别shi酶标记物与di物溶液)接触过的容器ying立即清洗干净。(xian以漂白水浸泡,zai以清水冲洗干净,可确保wu残留)

4. 阴性标准pin的xi光值低于yang性标准pin的xi光值。

a.yuan因:wei孔中的shiji未能chong分混合。

解决办法: shiji加完后,需轻敲盘四周shi其chong分混合均yun。

b.yuan因:洗板过程发生问题(2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.yuan因:添加yangpin或酶标记物的量bu一致。

解决办法: 请参考2-d.