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人脂dan白a(LP-a)试ji盒

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bbin注册名称: 人脂dan白a(LP-a)试ji盒
bbin注册型号: LP-a
bbin注册zhan商: ELISA试ji盒
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简单介绍

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人脂dan白a(LP-a)试ji盒  的详细介绍


人脂dan白a(LP-a)试ji盒

使yong说ming书

人脂dan白a(LP-a)试ji盒基本原理:

本试ji盒采yong双bbinwang址夹心ELISA法。yong抗人LP-abbinwang址包被yu酶标ban上,实验时样pin或标准pin中的人LP-ayu包被bbinwang址结合,游离的cheng穤hi幌慈ァi次加入生物素化的抗人LP-abbinwang址和辣根guoyang化物酶标记的亲和素。抗人LP-abbinwang址yu结合在包被bbinwang址上的人LP-a结合、生物素yu亲和素te异性结合而形cheng**复合物,游离的cheng穤hi幌慈ァ<尤胂陨玠i物(TMB),TMB在辣根guoyang化物酶的催化下呈现lan色,加终止yehou变cheng黄色。yong酶标仪在450nm波长处测OD值,人LP-a浓度yuOD450值之jian硈hou齜i,通guo绘制标准曲xian计算chu样pin中人LP-a的浓秖uⅫ/span>

人脂dan白a(LP-a)试ji盒描shu:

英文名称 Human LP-a (Lipoprotein a) ELISA Kit
中文名称 人脂dan白a(LP-a)酶联**xi附测ding试ji盒
货号 X-EL-H0160c zhong属 Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jian测方法 双bbinwang址夹心法
jian测范wei 0.234~15ng/mL 灵敏度 0.141ng/mL

试ji盒组cheng:

中文名称

英文名称

规ge

保存

  ELISA酶标ban(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准pin

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准pin&样pin稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化bbinwang址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化bbinwang址稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

di物rongye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

fengban竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册说ming书

Product  Description

  1 

 

謘hi毂ǜ妩/span>

Certificate of Analysis

  1 

 

te别说ming
*: [96T/48T](打开包装hou请及时jian查所you物pin是fu齐quan完整)
#: 
一zhou内使yongke存yu4℃,需长时jian存放或duo次使yong建议存yu-20.                                      

人脂dan白a(LP-a)试ji盒jian测前准备工作:

1. 请ti前20穤hong哟颖渲衠uchu试ji盒,平衡zhi室温。

2. 将浓缩洗祔ou簓ong双蒸水稀释(1:25)。weiyong完的放回4℃。从冰箱中quchu的浓缩洗祔ou簁e能you结jing,属yu正常现象,keyong40℃水浴微加re使结jing完quanrong解hou再配制洗祔ou海觬e温度瞙ui猚haoguo50℃,使yong时洗祔ou河ξ椅拢5bi帐箉ong。

3. 标准pinyu10000×g离心1穤hong樱尤氡曜紁in&样pin稀释ye1.0mLzhi冻干标准pin中,旋紧管gai,静置10穤hong樱舷碌叩故危琩ai其chong分rong解hou,yong移ye器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。ranhou根ju需要进行倍bi稀释(注:瞙ui獄hi接在反应孔中进行倍bi稀释)。建议配制cheng以下浓度:按照稀释方法tu例 标准pin&样pin稀释yezhi接作为空白孔0ng/mL。ru配制5ng/mL标准pin:qu0.5mL10ng/mL的上shu标准pin加入含you0.5mL标准pin&样pin稀释ye的EP管中,混匀即ke,其余浓度yi此lei推。 

4. 生物素化bbinwang址工作ye:实验前计算当次实验所需yong量(以100μL/孔计),实ji配制时应duo配制100-200μL。使yong前15穤hong樱陨锼鼗痓binwang址稀释ye稀释浓缩生物素化bbinwang址(1:100)cheng工作浓秖u5bi帐箉ong。

5. 酶结合物工作ye:实验前计算当次实验所需yong量(以100μL/孔计),实ji配制时应duo配制100-200μL。使yong前15穤hong樱悦附岷衔锵∈蛓e稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)cheng工作浓秖uⅫ/span>

礲i帐箉ong。

人脂dan白a(LP-a)试ji盒标准pin稀释方法tu例:(以500μL/管为例,也ke根ju实jiyong量来稀释,ru200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准pin或样pin各100μL 37℃孵育90穤hong尹/span>

2. 加入100μ生物素化bbinwang址工作ye,37℃孵育60穤hong尹/span>

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结合物工作ye, 37℃孵育30穤hong尹/span>

5. 洗涤5

6. 加入90μLdi物rongye, 37℃孵育15穤hong幼髖ou

7. 加入50μL终止ye,立即在450nm波长处测量OD

8. 结果计算

一、操作因素对ELISA结果的影xiangELISA操作步骤复杂,操作bu当将引起较大的误差。以下叙shu各个步骤中的影xiang因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.bi色

二、hui区的设置通常情况下,ELISAding性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者jianyou一条分界xian被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),zhe是ding性**测ding结果报告的yiju。

三、标本复查ELISA手工jian测guocheng复杂,影xiang因素较duo,即使室内质控在控,也ke能因孔jian差异而造cheng结果的差异,因此加大复查力度是保证结果譲i沸缘膋e靠方法,biru对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的ke疑、弱阳衴uan瓯炯吧偌鹠o式的jian测结果进行复查。

四、结果判断和报告常yong下列几zhong方法表示结果:

1.ding性测ding

2.banding量测ding 结果襤ua阋缘味缺硎尽Ⅻ/span>

3.ding量测ding 即yongyi知量的标准pin作一系列稀释hou进行ELISA测ding,绘制标准曲xian,结果以优羓i炕虻ei表示。在ELISAding羕ao觳庵衜ei一块反应ban都必须绘制xiang应的标准曲xian。

注yi事项:

仔细阅读说ming书。

jian查试ji盒标签上的you效期。ru果chaoguoyou效期,请勿使yong。

按说ming书确ding所you试ji齐quan(数量、体积)。

标本制备要规范,mei份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。duan期内无法实验者,注yi低温保存。

准备好所you实验e外所需物pin,(biru移ye器,试管,清洗器,酶标仪)。

按说ming书将所yong试ji平衡zhi室温,根jujian测标本数量确ding所需试ji的量。

jian查试ji盒内meizhong试ji的贮存条件,保证所you试ji均按照试ji盒内说ming书推jian的条件存储。

jian查bu稳ding或者变质的试jirongye(biruchen淀或变色)。youxie试ji,biru标准pin稀释ye或者jian测稀释ye,ke能在设计时就含youchen淀物。所you试ji在滴入酶标ban之前,必需chong分混詑u6鴜ouyuchen淀物的te性,在加入酶标ban之前,必需bu停搅拌。

保证chong分的孵育时jian和温秖uⅫ/span>

qie勿使yongbu同生产pi号的试jiqu代现you试ji或混合现you试ji。

在混合或rong解dan白rongye时,避免pao沫产生。

在实验开shi之前,安排好实验liucheng。

在实验开shi之前,清洁工作台。

若you问题,应yu我公薺ing虼砩痰募ji鮶hi硓hi袋/span>

人脂dan白a(LP-a)试ji盒结果判断:

1. mei个标准pin的OD值减去空白孔的OD值hou作tu,ru设置复孔,则应qu其平均值计算。襶uan曜紁in的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘chu标准曲xian。亦ke以OD值为横坐标,标准pin的浓度为纵坐标,绘chu标准曲xian。

2. 推jian使yong专业的曲xian制作软件,rucurve expert 1.31.4,在软件界面jike根ju样pinOD值,you标准曲xian查chuxiang应的浓度,乘以稀释倍数ui鄈e将样pin的OD值代入标准曲xian的拟合方cheng式,计算chu样pin浓度,再乘以稀释倍数,即为样pin的实ji浓秖uⅫ/span>

3. 若样pinOD值高yu标准曲xian上限,应适当稀释hou重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。 

脂dan白a(LP-a)试ji盒you效期稳ding性kao察

本试验以脂dan白a(LP-a)为例

1.        OD值:

正常保存条件下you效期内和chaoguoyou效期2个yue所测OD值bi较

正常you效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chaoguo2个yueyou效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:穤hi饄uding值血清及血浆中加入襤uan康闹琩an白a(LP-a)标准pin,重复测ding并计算其pin均值,回shou率为测ding值yu理论值的bi率。

        正常保存条件下you效期内和guoyou效期2个yueelisa 试ji盒回shou聅hi觳饨峁?/span>

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       xian性:穤hi饄uding值血清及血浆中加入襤uan康闹琩an白a(LP-a)标准pin,并将标本按1:2,1:4,1:8稀释,xian性范wei即为稀释hou样本中脂dan白a(LP-a)含量的测ding值yu理论值的bi率。

         正常保存条件下you效期内和guoyou效期2个yueelisa 试ji盒回xian性jian测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精mi度:以样pin测ding值的变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

pi内差:qu同一pi次试ji盒对低值,中值簍ou咧笛窘衐ing羕ao觳猓琺ei份样本测ding20次,穤hi鸺扑鉨u同浓度样本的平均值和SD值。

pijian差:选qu 3 个bu同pi次的试ji盒穤hi鸲缘汀⒅小⒏咧礵ing值样本进行ding量测ding, mei个样本使yong同一试ji盒重复测ding 8 次,穤hi鸺扑鉨u同浓度样本的平均值及 SD 值。(pi内差: CV<10%;pijian差: CV<11%)

       正常保存条件下you效期内和guoyou效期2个yueelisa 试ji盒回精mi度jian测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人脂dan白a(LP-a)试ji盒会chu现的问题及解决办法:

1. 加入反应终止yehou,没youxi光值或xi光值偏低。

a.原因:wei加入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.原因:试ji盒内容物wei能chong分回。

解决办法:确ding试ji盒内容物回温hou再进行操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请yu操作步骤4,适当延长温育时jian。

d.原因:wei使yong试ji盒的清洗ye清洗。

解决办法: 请yong试ji盒内所ti供的清洗ye清洗。

e.原因:试ji盒yiguoyou效期限。

解决办法:请geng换chengreng在you效期限内的试ji盒。

2. 标准曲xianxian性bu佳,或是平行性bu好。

a.原因:温育wei置避光bu好或受到qiliu干rao。

解决办法: 请确认温育wei置jibutou光也butou风(ruchou屉内)

b.原因:操作时jian拖太久。

解决办法:请在方法熟练hou再进行操作。

c.原因:微孔jianxiang互污染。

解决办法: 加样pin时,请小心勿溅chu微孔外,以免造cheng其它微孔的污染。

d.原因:标准pin或酶标记物所加入的量瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解决办法:请使yongyi校正guo的移ye枪,并确保其yuxi头之jianyou高度mi合性。

e.原因:添加样pin或试ji的操作方法bu正确。

解决办法:加样pin或试ji时,xi头请勿接触微孔。

f.原因:洗banguocheng发生问题(ru管路du塞、洗完banhouwei立刻进行下一步骤)

解决办法:请随时监控洗ban机洗banguocheng,洗完hou立即进行下一步骤。

3. xi光值均偏高(或xian性bu筯uan伏/span>)

a.原因:室温太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩duan步骤4的温育时jian。

b.原因:di物rongye受到污染。

解决办法: 若发现di物rongyeyi呈现淡lan色,请瞙ui偈箉ong。

c.原因:反应时jianchaoguo太久。

解决办法:请控謕in从κ眏ian。

d.原因:酶标记物污染了盒内其它试ji。

解决办法:使yongguo的xi头应立即丢qi,ke避免试jijianxiang互污染,凡是试ji(te别是酶标记物yudi物rongye)接触guo的容器应立即清洗干jing。(xian以piao白水浸pao,再以清水冲洗干jing,ke确保无残留)

4. 阴衴uan曜紁in的xi光值低yu阳衴uan曜紁in的xi光值。

a.原因:微孔中的试jiwei能chong分混合。

解决办法: 试ji加完hou,需轻敲pan四zhou使其chong分混合均詑uⅫ/span>

b.原因:洗banguocheng发生问题(2-f.)

解决办法:请cankao2-f.

c.原因:添加样pin或酶标记物的量瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解决办法: 请cankao2-d.