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人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒

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bbin注册xing号: 5-LO
bbin注册展商: ELISA试剂盒
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简dan介绍

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人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒  的详细介绍


人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒

使yong说明书

人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒基本原li:

本试剂盒采yong双bbin网zhi夹心ELISAfa。yong抗人5-LObbin网zhi包被于酶标板上,实验时yang品或标譲ifen械娜?-LO与包被bbin网zhi结he,游li的成fen被洗去。yi次jia入sheng物su化的抗人5-LObbin网zhihe辣gen过yang化物酶标记的亲hesu。抗人5-LObbin网zhi与结he在包被bbin网zhi上的人5-LO结he、sheng物su与亲hesu特异性结he而xing成**复he物,游li的成fen被洗去。jia入显色底物(TMB),TMB在辣gen过yang化物酶的催化下cheng现蓝色,jia终止液后变成huang色。yong酶标仪在450nmbo长chuceOD值,人5-LO浓度与OD450值之间cheng正比,通过绘制标准曲线ji算出yang苀en腥?-LO的浓度。

人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒描述:

英文ming称 Human 5-LO (Arachidonate 5-Lipoxygenase) ELISA Kit
謝ing膍ing称 人5脂jiayang酶(5-LO)酶联**吸附ce定试剂盒
货号 X-EL-H0223c 种shu Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方fa 双bbin网zhi夹心fa
检ce范围 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒组成:

謝ing膍ing称

英文ming称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

donggan标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标譲i饵/span>&yang品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物su化bbin网zhi

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物su化bbin网zhi稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结he物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结he物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后请ji时检查所觴ing锲肥欠衿雚uan完zheng)
#: 
一zhouna使yong可存于4℃,需长时间存放或多次使yongjian议存于-20.                                      

人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒检ce前准备工作:

1. 请提前20fen钟从冰箱中取出试剂簒iao胶鈠hi室温。

2. 将浓缩洗涤液yong双蒸shui稀释(1:25)。未yong完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结jing,shu于正常现xiang,可yong40℃shuiyu微jia热使结jing完quan溶解后zai配制洗涤襤ai╦ia热温度不要超过50℃,使yong时洗涤液应为室温)。当ri使yong。

3. 标譲i饵/span>10000×gli心1fen钟,jia入标譲i饵/span>&yang品稀释液1.0mLzhidonggan标譲ifenxiao艄芨牵瞶hi10fen钟,上下颠倒数次,待其充fen溶解后,yong移液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后genju需要进行bei眗en∈停ㄗⅲ翰灰苯釉诜从字薪衎ei眗en∈停ian议配制成以下浓度:按照稀释方fa图例 标譲i饵/span>&yang品稀释液直接作为kong白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mL的上述标譲i穓ia入含有0.5mL标譲i饵/span>&yang品稀释液的EP管謝iao煸燃纯桑溆嗯ǘ葃i此类推。 

4. sheng物su化bbin网zhi工作襤ai菏笛榍癹i算当次实验所需yong量(以100μL/孔ji),实ji配制时应多配制100-200μL。使yong前15fen钟,以sheng物su化bbin网zhi稀释襤e∈团ㄋ鮯heng物su化bbin网zhi(1:100)成工作浓度。当ri使yong。

5. 酶结he物工作襤ai菏笛榍癹i算当次实验所需yong量(以100μL/孔ji),实ji配制时应多配制100-200μL。使yong前15fen钟,以酶结he物稀释襤e∈团ㄋ酎/span>HRP酶结he物(1:100)成工作浓度。

当ri使yong。

人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒标譲i废∈头絝a图例aiㄒ狱/span>500μL/管为例,也可genju实jiyong量lai稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中jia入标譲i坊騳ang品各100μL 37℃孵育90fen钟

2. jia入100μsheng物su化bbin网zhi工作襤ai?/span>37℃孵育60fen钟

3. 洗涤3

4. jia入100μL酶结he物工作襤ai?/span> 37℃孵育30fen钟

5. 洗涤5

6. jia入90μL底物溶襤ai?/span> 37℃孵育15fen钟左右

7. jia入50μL终止襤ai⒓丛冱/span>450nmbo长chuce量OD

8. 结果ji算

一、操作因su对ELISA结果的ying响ELISA操作步骤复杂,操作瞙uai苯珁in起较大的wu差。以下叙述各个步骤中的ying响因su。

1.jiayang

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

er、灰区的设zhi通常情况下,ELISA定性实验襶u把粜yu県e“阴衴u眑ai报告结果,两zhe间有一tiaofen界线被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),这是定性**ce定结果报告的yiju。

三、标本复查ELISAshou工检ce过程复杂,ying响因su较多,即使室na质kong在kong,也可能因孔间差异而造成结果的差异,因此jia大复查力度是保zheng结果譲i沸缘目煽糠絝a,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康目蓎i、ruo阳性标本ji少见模式的检ce结果进行复查。

四、结果判断he报告常yong下列几謟hi絝a表示结果:

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果一般以滴度表示。

3.定量ce定 即yong已zhi量的标譲i纷饕幌盗邢∈秃蠼宵/span>ELISAce定,绘制标准曲线,结果以优良量或dan位表示。在ELISA定羕ao靋e中每一块反应板dubi须绘制相应的标准曲线。

注意事xiang:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检查试剂盒标签上的有效qi。如果超过有效qi,请勿使yong。

按说明书确定所有试剂齐quan(数量、体积)。

标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量穤hong白霰阜荨uanqina无fa实验zhe,注意di温保存。

准备好所有实验额外所需物品,(比如移液器,试管,qing洗器,酶标仪)。

按说明书将所yong试剂平衡zhi室温,genju检ce标本数量确定所需试剂的量。

检查试剂盒na每种试剂的贮存tiaojian,保zheng所有试剂均按照试剂盒na说明书推荐的tiaojian存储。

检查不稳定或zhe变质的试剂溶襤aiū热绯羋ian或变色)。有xie试剂,比如标譲i废∈鸵夯騴he检ce稀释襤ai赡茉谏鑚i时就含有沉dian物。所有试剂在滴入酶标板之前,bi需充fen混匀。而由于沉dian物的特性,在jia入酶标板之前,bi需不停搅拌。

保zheng充fen的孵育时间he温度。

莤ing鹗箉ong不同sheng产批号的试剂取代现有试剂或混he现有试剂。

在混he或溶解dan白溶液时,避免泡沫产sheng。

在实验开始之前,an排好实验流程。

在实验开始之前,qing洁工作tai。

若觴ing侍猓τ胛夜净虼鷏i商的糺i踔Сzhi袋/span>

结果判断:

1. 每个标譲i返命/span>OD值减去kong白孔的OD值后作图,如设zhi复孔,则应取其平均值ji算。以标譲i返呐ǘ任嶙辏?/span>OD值为zong坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标譲i返呐ǘ任獄ong坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使yongzhuan业的曲线制作ruanjian,如curve expert 1.31.4,在ruanjian界面ji可genjuyang品OD值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释bei数;亦可将yang品的OD值代入标准曲线的nihe方程式,ji算出yang品浓度,zai乘以稀释bei数,即为yang品的实ji浓度。

3. 若yang品OD值高于标准曲线上xian,应适当稀释后重ce,ji算浓度时应乘以稀释bei数。 

5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒有效qi稳定性kao察

本试验以5脂jiayang酶(5-LO)为例

1.        OD值:

正常保存tiaojian下有效qinahe超过有效qi2个月所ceOD值比较

正常有效qinaOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:fen别于定值血qingji血浆中jia入襤uan康?脂jiayang酶(5-LO)标譲i罚馗碿e定并ji算其品均值,回收率为ce定值与li论值的比率。

        正常保存tiaojian下有效qinahe过有效qi2个月elisa 试剂盒回收率检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:fen别于定值血qingji血浆中jia入襤uan康?脂jiayang酶(5-LO)标譲i罚⒔瓯景滁/span>1:2,1:4,1:8稀释,线性范围即为稀释后yang本中5脂jiayang酶(5-LO)含量的ce定值与li论值的比率。

         正常保存tiaojian下有效qinahe过有效qi2个月elisa 试剂盒回线性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以yang品ce定值的变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批na差:取同一批次试剂盒对di值,中值簍ou咧祔ang本进行定羕ao靋e,每份yang本ce定20次,fen别ji算不同浓度yang本的平均值heSD值。

批间差:选取 3 个不同批次的试剂盒fen别对di、中、高值定值yang本进行定量ce定, 每个yang本使yong同一试剂盒重复ce定 8 次,fen别ji算不同浓度yang本的平均值ji SD 值。(批na差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存tiaojian下有效qinahe过有效qi2个月elisa 试剂盒回精密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人5脂jiayang酶(5-LO)试剂盒会出现的问题ji解决办fa:

1. jia入反应终止液后,没觴ing庵祷蛭庵灯玠i。

a.原因:未jia入酶标记物。

解决办fa:请按照操作步骤进行。

b.原因:试剂盒narong物未能充fen回。

解决办fa:确定试剂盒narong物回温后zai进行操作。

c.原因:室温太di。

解决办fa:若室温太di(<19),请于操作步骤4,适当yan长温育时间。

d.原因:未使yong试剂盒的qing洗液qing洗。

解决办fa: 请yong试剂盒na所提gong的qing洗液qing洗。

e.原因:试剂盒已过有效qixian。

解决办fa:请更huan成仍在有效qixianna的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育位zhi避光不好或受到气流gan扰。

解决办fa: 请确ren温育位zhiji不tou光也不tou风(如抽屉na)

b.原因:操作时间拖太久。

解决办fa:请在方fashu练后zai进行操作。

c.原因:微孔间相互wu染。

解决办fa: jiayang品时,请小心勿jian出微孔外,以免造成其它微孔的wu染。

d.原因:标譲i坊蛎副昙俏锼鵭ia入的量不一致。

解决办fa:请使yong已xiao正过的移液枪,并确保其与吸蚮en溆懈叨让躧e衴uⅫ/span>

e.原因:添jiayang品或试剂的操作方fa不正确。

解决办fa:jiayang品或试剂时,吸头请勿接chu微孔。

f.原因e窗骞蘤asheng问题(如管路堵sai、洗完板后未立刻进行下一步骤)

解决办fa:请随时jiankong洗板机洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不筯uan伏/span>)

a.原因:室温太高(>25)

解决办fa: 若无fa降di室na温度,请适当缩duan步骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到wu染。

解决办fa: 若fa现底物溶液已cheng现淡蓝色,请不要zai使yong。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办fa:请kong制反应时间。

d.原因:酶标记物wu染liao盒na其它试剂。

解决办fa:使yong过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互wu染,fan是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接chu过的rong器应立即qing洗gan净。(先以漂白shui浸泡,zai以qingshui冲洗gan净,可确保无残留)

4. 阴性标譲i返奈庵礵i于阳性标譲i返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原因:微孔中的试剂未能充fen混he。

解决办fa: 试剂jia完后,需轻敲盘四zhou使其充fen混he均匀。

b.原因e窗骞蘤asheng问题(2-f.)

解决办fa:请cankao2-f.

c.原因:添jiayang品或酶标记物的量不一致。

解决办fa: 请cankao2-d.

 

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