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dashu钙diaosu(CAM)酶lian免疫吸附检测试剂盒

如果nin对gaibbin注ceganxing趣的话,可yi
bbin注ce名称: dashu钙diaosu(CAM)酶lian免疫吸附检测试剂盒
bbin注ce型号: CAM
bbin注cezhan商: ELISA试剂盒
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dashu钙diaosu(CAM)酶lian免疫吸附检测试剂盒  的详细介绍

dashu钙diaosu(CAM)酶lian**吸附检测试剂盒

使yong说ming书

预qi应yong

ben试剂盒运yongshuangbbinwang址紉ing命span>ELISA法定liang测定dashuxue清、xue浆、组织yun浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和qi他生物液体中钙diaosu(CAM)含liang。

dashu钙diaosu(CAM)酶lian**吸附检测试剂盒基ben原理:

ben试剂盒采yongshuangbbinwang址紉ing腅LISA法。yong抗dashu钙diaosu(CAM)bbinwang址包被yu酶标ban上,实yan时yang品或标准品中的dashu钙diaosu(CAM)与包被bbinwang址结合,游离的cheng分被洗去。依次加入生物su化的抗dashu钙diaosu(CAM)bbinwang址和辣根过氧化物酶标记的亲和su。抗dashu钙diaosu(CAM)bbinwang址与结合在包被bbinwang址上的dashu钙diaosu(CAM)结簒i⑸飐u与亲和su特异性结合而xingcheng**复合物,游离的cheng分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化xia呈现蓝色,加终止液后变cheng黄色。yong酶标仪在450nmbo长chu测OD值,dashu钙diaosu(CAM)浓度与OD450值之间硈hou齜i,通过绘制标准曲xian计算出yang品中dashu钙diaosu(CAM)的浓度。

描述:

英文名称 Rat CAM (Calmodulin) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> dashu钙diaosu(CAM)酶lian**吸附测定试剂盒
货号 X-EL-R0140c 謟hi簏/span> Rat/dashu
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuangbbinwang址紉ing姆?/span>
检测穌uan?/span> 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

组cheng:

謝ing拿劈/span>

英文名称

规格

保存

  ELISA酶标ban(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&yang品xi释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物su化bbinwang址

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物su化bbinwang址xi释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物xi释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

穋ongχ罩挂裹/span>

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封ban覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注ce说ming书

Product  Description

  1 

 

zhi检bao告

Certificate of Analysis

  1 

 

特bie说ming
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所觴ing锲肥欠衿肴暾?/span>
#: 
一zhou内使yong可存yu4℃,需长时间存fang或多次使yongjianyi存yu-20.                                      

dashu钙diaosu(CAM)酶lian**吸附检测试剂盒检测qian准备工作:

1. 请提qian20分钟congbing箱中取出试剂盒,平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液yongshuang蒸水xi释(1:25)。蝐ong猛甑膄ang回4℃。congbing箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属yu正常现象,可yong40℃水yuwei加热使结晶完全溶解后再配制洗涤襤ai尤任露炔hui?0℃,使yong时洗涤液应为室温)。礲i帐箉ong。

3. 标准品: yu10000×g离心1分钟,加入标准品&yang品xi释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管盖,jing置10分钟,上xiadian倒数次,待qi充分溶解后,yong移液器将qi轻轻混yun(浓度为10ng/mL)。然后根据需要进xingbeibixi释(注:瞙ui苯釉诜cong字薪鴛ingbeibixi释)。jianyi配制chengyixia浓度:按照xi释方法tu例 标准品&yang品xi释液直接作为kong白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&yang品xi释液的EP管中,混yun即可,qi余浓度依此leitui。 

4. 生物su化bbinwang址工作襤ai菏祔anqian计算当次实yan所需yongliang(yi100μL/孔计),实ji配制时应多配制100-200μL。使yongqian15分钟,yi生物su化bbinwang址xi释液xi释浓缩生物su化bbinwang址(1:100)cheng工作浓度。礲i帐箉ong。

5. 酶结合物工作襤ai菏祔anqian计算当次实yan所需yongliang(yi100μL/孔计),实ji配制时应多配制100-200μL。使yongqian15分钟,yi酶结合物xi释液xi释浓缩HRP酶结合物(1:100)cheng工作浓度。

礲i帐箉ong。

dashu钙diaosu(CAM)酶lian**吸附检测试剂盒标准品xi释方法tu例ai▂i500μL/管为例,ye可根据实jiyongliang来xi释,如200μL/管)

1.使yongqian将所有的试剂和标眏ing簃an均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。

2.标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品xi释液1mL,盖好后室温jing置da约10分钟,同时反复dian倒/搓动yi助溶解,qi浓度为10ng/mL。准备7个xi释标准品的EP管,每个EP管中加入500μL的标准品xi释襤ai鐃u所示依次beibixi释,标准品xi释液(0pg/mL)直接作为kong白孔。为保证实yan结果觴ing裕看问祔an请使yong新的标准品溶液。

      

1. 在各孔中加入标准品或yang品各100μL, 37℃孵育90分钟

2. 加入100μL 生物su化bbinwang址工作襤ai?7℃孵育60分钟

3. 洗涤3次

4. 加入100μL酶结合物工作襤ai?nbsp;37℃孵育30分钟

5. 洗涤5次

6. 加入90μL底物溶襤ai?nbsp;37℃孵育15分钟zuo右

7. 加入50μL终止襤ai⒓丛?50nmbo长chu测liangOD值

8. 结果计算

一、操作因su对ELISA结果的影响ELISA操作bu骤复杂,操作不当将引起较da的误差。yixia叙述各个bu骤中的影响因su。

1.加yang

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.bi色

二、hui区的设置通常情kuangxia,ELISA定性实yanyi“阳衴u焙汀耙跣yu崩碽ao告结果,两者间有一条分界xian被称为“阳性判断值”(cut-off value,CO值),这是定性**测定结果bao告的依据。

三、标ben复查ELISA手工检测过程复杂,影响因su较多,即使室内zhi控在控,ye可能因孔间差异而造cheng结果的差异,因此加da复查力度是保证结果准确性的可靠方法,bi如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Abdeng项目的可疑、ruo阳衴uan阞en及少见模式的检测结果进xing复查。

四、结果判断和bao告常yongxia列几种方法表示结果:

1.定性测定

2.ban定liang测定 结果一banyidi度表示。

3.定liang测定 糲ong靡阎猯iang的标准品作一系列xi释后进xingELISA测定,绘制标准曲xian,结果yi优良liang或danwei表示。在ELISA定liang检测中每一块穋ongandubi须绘制相应的标准曲xian。

dashu钙diaosu(CAM)酶lian**吸附检测试剂盒会出现的问ti及解决ban法:

1. 加入穋ongχ罩挂汉螅挥xing庵祷蛭庵灯汀

a.原因:未加入酶标记物。

解决ban法:请按照操作bu骤进xing。

b.原因:试剂盒内容物未能充分回。

解决ban法:确定试剂盒内容物回温后再进xing操作。

c.原因:室温tai低。

解决ban法:若室温tai低(<19℃),请yu操作bu骤4,shi当延长温育时间。

d.原因:未使yong试剂盒的清洗液清洗。

解决ban法: 请yong试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过觴ingixian。

解决ban法:请更换cheng仍在觴ingixian内的试剂盒。

2. 标准曲xianxian性不佳,或是平xing性不好。

a.原因:温育wei置避光不好或受到qi流干扰。

解决ban法: 请确认温育wei置既不tou光ye不tou风(如抽屉内)。

b.原因:操作时间拖tai久。

解决ban法:请在方法熟lian后再进xing操作。

c.原因:wei孔间相互污染。

解决ban法: 加yang品时,请小心勿溅出wei孔外,yi免造chengqi它wei孔的污染。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的liang瞙ui恢隆

解决ban法:请使yong已校正过的移液枪,并确保qi与吸头之间有gao度密合衴u

e.原因:添加yang品或试剂的操作方法不正确。

解决ban法:加yang品或试剂时,吸头请勿接chuwei孔。

f.原因:洗ban过程发生问ti(如管路堵塞、洗完ban后未立刻进xingxia一bu骤)。

解决ban法:请随时监控洗ban机洗ban过程,洗完后立即进xingxia一bu骤。

3. 吸光值均偏gao(或xian性不够陡)。

a.原因:室温taigao(>25℃)。

解决ban法: 若无法降低室内温度,请shi当缩短bu骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解决ban法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请瞙ui偈箉ong。

c.原因:穋ongκ奔涑齮ai久。

解决ban法:请控制穋ongκ奔洹

d.原因:酶标记物污染liao盒内qi它试剂。

解决ban法:使yong过的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相互污染,fan是试剂(特bie蕅iao副昙俏镉氲孜锶芤?接chu过的容器应立即清洗干jing。(先yi漂白水浸泡,再yi清水冲洗干jing,可确保无残留)

4. 阴衴uan曜计返奈庵档蛓u阳衴uan曜计返奈庵怠

a.原因:wei孔中的试剂未能充分混簒i

解决ban法: 试剂加完后,需轻qiao盘四zhou使qi充分混合均yun。

b.原因:洗ban过程发生问ti(同2-f.)。

解决ban法:请参kao2-f.

c.原因:添加yang品或酶标记物的liang瞙ui恢隆

解决ban法: 请参kao2-d.

注yi事项:

A 仔细阅秎iao祄ing书。

B 检查试剂盒标签上的觴ingi。如果超过觴ingi,请勿使yong。

C 按说ming书确定所有试剂齐全(数liang、体积)。

D 标ben制备要规范,每份标ben体积要按2-3个复孔yi上的liang制备(贮存),尽liang分装zuo备份。短qi内无法实yan者,注yi低温保存。

E 准备好所有实yan额外所需物品,(bi如移液器,试管,清洗器,酶标仪)。

F 按说ming书将所yong试剂平衡至室温,根据检测标ben数liang确定所需试剂的liang。

G 检查试剂盒内每謟hi约恋闹嫣跫Vに惺约辆凑帐约梁心谒祄ing书tui荐的条件存储。

H 检查不稳定或者变zhi的试剂溶襤ai╞i如沉淀或变色)。有xie试剂,bi如标准品xi释液或者检测xi释襤ai赡茉谏杓剖ben秃谐恋砦铩K惺约猎赿i入酶标ban之qian,bi需充分混yun。而由yu沉淀物的特性,在加入酶标ban之qian,bi需不停搅ban。

I 保证充分的孵育时间和温度。

J 莤ing鹗箉ong不同生产pi号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

K 在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产生。

L 在实yan开始之qian,癱ai藕檬祔an流程。

M 在实yan开始之qian,清洁工作台。

N 若觴ing蕋i,应与我gong薺ing虼砩痰募ji踔С謑ian系

dashu钙diaosu(CAM)酶lian**吸附检测试剂盒结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去kong白孔的OD值后作tu,如设置复孔,则应取qi平均值计算。yi标准品的浓度为heng坐标,OD謉i葑辏娉霰曜记鷛ian。亦可yiOD謉i猦eng坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标准曲xian。

2. tui荐使yongzhuan业的曲xian制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界mian既可根据yang品OD值,由标准曲xian查出相应的浓度,乘yixi释bei数ui嗫山珁ang品的OD值代入标准曲xian的拟合方程式,计算出yang苀angǘ龋俪藋ixi释bei数,即为yang品的实ji浓度。

3. 若yang品OD值gaoyu标准曲xian上xian,应shi当xi释后重测,计算浓度时应乘yixi释bei数。

 特异性:

ben试剂盒yongyu检测dashu钙diaosu(CAM),经检测与qi它相似物zhi无ming显jiao叉穋ongΑⅫspan>

由yu受到糺i跫皔angben来源的xian制,不可能完cheng对所有相guan或相似物zhijiao叉穋ong觳猓虼薭en试剂盒有可能与未经检测的qi它物zhi有jiao叉穋ongΑⅫb>

回shou率:

分bieyu定值xue清及xue浆yangben中加入一定liang的dashu钙diaosu(CAM)(加标yang品),重复测定并计算qi均值,回shou率为测定值与理lun值的bi率

xian性:

在定值xue清及xue浆yangben内加入shiliang的dashu钙diaosu(CAM),并beibixi释cheng 1:21:41:81:16 的待测yangben,xian性穌uanЪ次獂i释后yangben中dashu钙diaosu(CAM)含liang的测定值与理lun值的bi率。


dashu钙diaosu(CAM)酶lian**吸附检测试剂盒精密度:

精密度yongyang苀an舛ㄖ档谋湟煜凳?/span> CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

pi内差:取同pi次试剂盒对低、中、gao值定值yangben进xing定liang检测,每份yangben连续测定 20 次,分bie计算不同浓度yangben的平均值及 SD 值。

pi间差:选取 3 个不同pi次的试剂盒分bie对低、中、gao值定值yangben进xing定liang测定,每个yangben使yong同一试剂盒重复

测定 8 次,分bie计算不同浓度yangben的平均值及 SD 值。

pi内差: CV<10%

pi间差: CV<12%

稳定性:

经测定,试剂盒在觴ingi内按tui荐温度保存,qi活性降低聅hiu 5%

为减小外bu因su对试剂盒破坏qian后检测值的影响,实yan室的环境条件需尽liang保持一致,尤qi是实yan室内温度、湿度及温育条件。qi次由同一实yanyuan来进xing操作可减少人为误差。