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大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联免yixi附检ce试剂盒

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bbin注册名称: 大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联免yixi附检ce试剂盒
bbin注册xing号: CALU
bbin注册展shang: ELISA试剂盒
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简单介绍

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大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联免yixi附检ce试剂盒  的xiangxi介绍

大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**xi附检ce试剂盒

shi用说明shu

yu期应用

ben试剂盒运用双bbin网zhi夹心ELISA法定量ce定大鼠xueqing、xue浆、组织yun浆、xi胞裂解液、xi胞pei养上qing液和其他生物液体zhong钙腔蛋白(CALU)han量。

大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**xi附检ce试剂盒基ben原理:

ben试剂盒采用双bbin网zhi夹心ELISA法。用抗大鼠钙腔蛋白(CALU)bbin网zhi包被于酶biao板上,实验时样品或biaozhun苀en械拇笫蟾魄坏鞍?CALU)yu包被bbin网zhi结合,游离的成fen被洗去。依ci加入生物su化的抗大鼠钙腔蛋白(CALU)bbin网zhi和辣根过氧化物酶biaoji的qin和su。抗大鼠钙腔蛋白(CALU)bbin网zhiyu结簒ian诎籦bin网zhi上的大鼠钙腔蛋白(CALU)结合、生物suyuqin和su特yi性结合而形成**复合物,游离的成fen被洗去。加入xian色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加zhong止液后变成huang色。用酶biao仪在450nm波长chuceOD值,大鼠钙腔蛋白(CALU)浓度yuOD450值之jian呈正bi,通过绘制biaozhunqu线jisuanchu样苀en写笫蟾魄坏鞍?CALU)的浓度。

miao述:


基ben原理 miao述 试剂盒组成 caozuo步骤 更多资料
英文名称 Rat CALU (Calumenin) ELISA Kit
zhong文名称 大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**xi附ce定试剂盒
货号 X-EL-R0144c 种shu Rat/大鼠
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双bbin网zhi夹心法
检ce范围 0.78100000000000003~50ng/mL 灵敏度 0.46899999999999997ng/mL

组成:

zhong文名称

英文名称

gui格

保存

  ELISA酶biao板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biaozhun品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biaozhun品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物su化bbin网zhi

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物su化bbin网zhi稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

fan应zhong止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

bbin注册说明shu

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开包装后qing及时检查suo有物品是否齐全wan整)
#: 
一周nashi用可存于4℃,需长时jian存放或多cishi用建议存于-20.                                      

大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**xi附检ce试剂盒检ce前zhun备工zuo:

1. qing提前20fenzhong从冰xiangzhong取chu试剂簒iao琾ing衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用wan的放hui4℃。从冰xiangzhong取chu的浓缩洗涤液可能有结晶,shu于正常现象,可用40℃水浴微加热shi结晶wan全溶解后再pei制洗涤液(加热温度瞙ui猚hao过50℃,shi用时洗涤液应为室温)。礲i誷hi用。

3. biaozhun品: 于10000×g离心1fenzhong,加入biaozhun品&样品稀释液1.0mL至冻干biaozhun苀enxiao艄芨牵瞶hi10fenzhong,上下dian倒shuci,待其充fen溶解后,用移液qi将其qingqing混yun(浓度为50ng/mL)。ran后根据需要进行倍bi稀释(注:瞙ui獄hi接在fan应孔zhong进行倍bi稀释)。建议pei制成以下浓度:anzhao稀释方法图例 biaozhun品&样品稀释液zhi接zuo为空白孔0ng/mL。如pei制5ng/mLbiaozhun品:取0.5mL10ng/mL的上述biaozhun品加入han有0.5mLbiaozhun品&样品稀释液的EP管zhong,混yunji可,其余浓度依cilei推。 

4. 生物su化bbin网zhi工zuo液:实验前jisuandangci实验suo需用量(以100μL/縵hun疲导蕄ei制时应多pei制100-200μL。shi用前15fenzhong,以生物su化bbin网zhi稀释液稀释浓缩生物su化bbin网zhi(1:100)成工zuo浓度。礲i誷hi用。

5. 酶结合物工zuo液:实验前jisuandangci实验suo需用量(以100μL/縵hun疲导蕄ei制时应多pei制100-200μL。shi用前15fenzhong,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工zuo浓度。

礲i誷hi用。

大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**xi附检ce试剂盒biaozhun品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据实际用量来稀释,如200μL/管)

1.shi用前将suo有的试剂和biaoben缓man均衡至室温(18-25oC),试剂不能zhi接在37oC溶解。

2.biaozhun品(冻干品)ao科縝iaozhun品加入biaozhun品稀释液1mL,盖hao后室温静zhi大约10fenzhong,同时fan复dian倒/搓动以助溶解,其浓度为

50ng/mL
。zhun备7个稀释biaozhun品的EP管,每个EP管zhong加入500μL的biaozhun品稀释液,如图suo示依ci倍bi稀释,biaozhun品稀释液(0pg/mL)zhi接zuo为空白孔。为保证实验结果有效性,每ci实验qingshi用xin的biaozhun品溶液。

      

1. 在各孔zhong加入biaozhun品或样品各100μL, 37℃孵育90fenzhong

2. 加入100μL 生物su化bbin网zhi工zuo液,37℃孵育60fenzhong

3. 洗涤3ci

4. 加入100μL酶结合物工zuo液, 37℃孵育30fenzhong

5. 洗涤5ci

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15fenzhong左右

7. 加入50μLzhong止液,立ji在450nm波长chuce量OD值

8. 结果jisuan

一、caozuo因su对ELISA结果的影响ELISAcaozuo步骤复杂,caozuo不dang将引起较大的误差。以下叙述各个步骤zhong的影响因su。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.xian色

5.bi色

二、hui区的设zhi通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两zhejian有一条fen界线被称为“阳性判断值”(cut-off value,CO值),这是定性**ce定结果报告的依据。

三、biaoben复查ELISA手工检ce过程复杂,影响因su较多,jishi室na质控在控,也可能因縵hun洳顈i而造成结果的差yi,因ci加大复查li度是保证结果zhun确性的可靠方法,bi如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab祌en钅康目梢伞⑷跹粜詁iaoben及少见模式的检ce结果进行复查。

四、结果判断和报告常用下列几謟hi椒ū硎窘峁

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果一般以滴度表蔶in

3.定量ce定 ji用已知量的biaozhun品zuo一系列稀释后进行ELISAce定,绘制biaozhunqu线,结果以youliang量或单wei表蔶inT贓LISA定量检cezhong每一kuaifan应板都必须绘制相应的biaozhunqu线。

大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**xi附检ce试剂盒会chu现的问题及解决办法:

1. 加入fan应zhong止液后,mei有xi光值或xi光值偏低。

a.原因:未加入酶biaoji物。

解决办法:qinganzhaocaozuo步骤进行。

b.原因:试剂盒na容物未能充fenhui。

解决办法:确定试剂盒na容物hui温后再进行caozuo。

c.原因:室温tai低。

解决办法:ruo室温tai低(<19℃),qing于caozuo步骤4,适dang延长温育时jian。

d.原因:未shi用试剂盒的qing洗液qing洗。

解决办法: qing用试剂盒nasuo提供的qing洗液qing洗。

e.原因:试剂盒已过有效期xian。

解决办法:qing更换成仍在有效期xianna的试剂盒。

2. biaozhunqu线线性不佳,或是ping行性不hao。

a.原因:温育weizhi避光不hao或受到qi流干rao。

解决办法: qing确ren温育weizhiji不透光也不透风(如抽tina)。

b.原因:caozuo时jian拖taijiu。

解决办法:qing在方法shu练后再进行caozuo。

c.原因:微縵hun湎嗷ノ廴jin

解决办法: 加样品时,qing小心勿jianchu微孔wai,以免造成其ta微孔的污萰in

d.原因:biaozhun品或酶biaoji物suo加入的量瞙ui恢隆

解决办法:qingshi用已xiao正过的移液qiang,并确保其yuxi蚮en甹ian有gao度密合性。

e.原因:添加样品或试剂的caozuo方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,xi头qing勿接触微孔。

f.原因:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗wan板后未立刻进行下一步骤)。

解决办法:qing随时监控洗板ji洗板过程,洗wan后立ji进行下一步骤。

3. xi光值均偏gao(或线性不够陡)。

a.原因:室温taigao(>25℃)。

解决办法: ruo无法降低室na温度,qing适dang缩短步骤4的温育时jian。

b.原因:底物溶液受到污萰in

解决办法: ruo发现底物溶液已呈现淡蓝色,qing瞙ui賡hi用。

c.原因:fan应时jianchao过taijiu。

解决办法:qing控制fan应时jian。

d.原因ao竍iaoji物污染liao盒na其ta试剂。

解决办法:shi用过的xi头应立ji丢弃,可避免试糽iang湎嗷ノ廴荆彩鞘约?特别是酶biaoji物yu底物溶液)接触过的容qi应立jiqing洗干净。(先以漂白水浸pao,再以qing水冲洗干净,可确保无残留)

4. 阴性biaozhun品的xi光值低于阳性biaozhun品的xi光值。

a.原因:微孔zhong的试剂未能充fen混合。

解决办法: 试糽iang觲an后,需qing敲盘四周shi其充fen混合均yun。

b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。

解决办法:qing参考2-f.

c.原因:添加样品或酶biaoji物的量瞙ui恢隆

解决办法: qing参考2-d.

注意事项:

A zixi阅秎iao得鱯hu。

B 检查试剂盒biao签上的有效期。如果chao过有效期,qing勿shi用。

C 癱i得鱯hu确定suo有试剂齐全(shu量、体积)。

D biaoben制备要gui范,每份biaoben体积要an2-3个复孔以上的量制备(zhu存),jin量fen装做备份。短期na无法实验zhe,注意低温保存。

E zhun备haosuo有实验额waisuo需物品,(bi如移液qi,试管,qing洗qi,酶biao仪)。

F 癱i得鱯hu将suo用试剂ping衡至室温,根据检cebiaobenshu量确定suo需试剂的量。

G 检查试剂盒na每种试剂的zhu存条件,保证suo有试剂均anzhao试剂盒na说明shu推荐的条件存储。

H 检查不稳定或zhe变质的试剂溶液(bi如沉淀或变色)。有些试剂,bi如biaozhun品稀释液或zhe检ce稀释液,可能在设ji蔮en蚳an有沉淀物。suo有试剂在滴入酶biao板之前,必需充fen混yun。而由于沉淀物的特性,在加入酶biao板之前,必需不停搅拌。

I 保证充fen的孵育时jian和温度。

J qie勿shi用不同生产pi号的试剂取代蟴hong惺约粱蚧旌舷zhong惺约痢

K 在混合或溶解蛋白溶液时,避免pao沫产生。

L 在实验开始之前,安排hao实验流程。

M 在实验开始之前,qing洁工zuo台。

N ruo有问题,应yuwo公司或代理shang的技术支持联系

大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**xi附检ce试剂盒结果判断:

1. 每个biaozhun品的OD值减去空白孔的OD值后zuo图,如设zhi复孔,则应取其ping均值jisuan。以biaozhun品的浓度为横坐biao,OD值为纵坐biao,绘chubiaozhunqu线。亦可以OD值为横坐biao,biaozhun品的浓度为纵坐biao,绘chubiaozhunqu线。

2. 推荐shi用专ye的qu线制zuo软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界面ji可根据样品OD值,由biaozhunqu线查chu相应的浓度,cheng以稀释倍shuui嗫山返腛D值代入biaozhunqu线的ni合方程式,jisuanchu样品浓度,再cheng以稀释倍shu,糲i返氖导逝ǘ取

3. ruo样品OD值gao于biaozhunqu线上xian,应适dang稀释后重ce,jisuan浓度时应cheng以稀释倍shu。

 特yi性:

ben试剂盒用于检ce大鼠钙腔蛋白(CALU),经检ceyu其ta相似物质无明xian交叉fan应。

由于受到技术及样ben来源的xian制,不可能wan成对suo有相guan或相似物质交叉fan应检ce,因ciben试剂盒有可能yu未经检ce的其ta物质有交叉fan应。

hui收率:

fen别于定值xueqing及xue浆样benzhong加入一定量的大鼠钙腔蛋白(CALU)(加biao样品),重复ce定并jisuan其均值,hui收率为ce定值yu理论值的bi率

线性:

在定值xueqing及xue浆样benna加入适量的大鼠钙腔蛋白(CALU),并倍bi稀释成 1:21:41:81:16 的待ce样ben,线性范围糲i∈秃笱鵥enzhong大鼠钙腔蛋白(CALU)han量的ce定值yu理论值的bi率。


大鼠钙腔蛋白(CALU)酶联**xi附检ce试剂盒精密度:

精密度用样品ce定值的变yi系shu CV 表蔶inⅫ/span>CV(%) = SD/mean×100

pina差:取同pici试剂盒对低、zhong、gao值定值样ben进行定量检ce,每份样benlian续ce定 20 ci,fen别jisuan不同浓度样ben的ping均值及 SD 值。

pijian差:选取 3 个不同pici的试剂盒fen别对低、zhong、gao值定值样ben进行定量ce定,每个样benshi用同一试剂盒重复

ce定 8 ci,fen别jisuan不同浓度样ben的ping均值及 SD 值。

pina差: CV<10%

pijian差: CV<12%

稳定性:

经ce定,试剂盒在有效期naan推荐温度保存,其活性降低率小于 5%

为减小wai部因su对试剂盒破坏前后检ce值的影响,实验蕐e幕肪程跫鑚in量保持一致,尤其是实验室na温度、湿度及温育条件。其ci由同一实验员来进行caozuo可减少人为误差。