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大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian免疫吸附检ceshi剂盒

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bbin注册名称: 大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian免疫吸附检ceshi剂盒
bbin注册型hao: αFP
bbin注册展商: ELISAshi剂盒
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大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian免疫吸附检ceshi剂盒  的xiang细jieshao

大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian**吸附检ceshi剂盒

使用shuoming书

预期应用

本shi剂盒yun用双bbin网zhi夹心ELISA法定量ce定大鼠xue清、xue浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培yangshang清液和其他生物液体中甲tai蛋白(αFP)含量。

大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian**吸附检ceshi剂盒基本原理:

本shi剂盒采用双bbin网zhi夹心ELISA法。觤ei勾笫蠹譼ai蛋白(αFP)bbin网zhibao被于mei标板shang,shiyanshi样品或标准苀en械拇笫蠹譼ai蛋白(αFP)与bao被bbin网zhi结合,游li的成fen被xi去。襩ai蝚ia入生物素hua的抗大鼠甲tai蛋白(αFP)bbin网zhi和辣根过氧hua物mei标记的亲和素。抗大鼠甲tai蛋白(αFP)bbin网zhi与结合在bao被bbin网zhishang的大鼠甲tai蛋白(αFP)结合、生物素与亲和素特异性结合而形成**复合物,游li的成fen被xi去。jia入显se底物(TMB),TMB在辣根过氧hua物mei的cuihua下呈现蓝se,jia终止液后变成huangse。用mei标仪在450nm波长chuceOD值,大鼠甲tai蛋白(αFP)浓du与OD450值之jian呈正比,通过绘制标准曲线计算出样苀en写笫蠹譼ai蛋白(αFP)的浓du。

miao述:

英wen名称 Rat αFP (Alpha-Fetoprotein) ELISA Kit
中wen名称 大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian**吸附ce定shi剂盒
huohao X-EL-R0153c 謟hi簏/span> Rat/大鼠
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双bbin网zhi夹心法
检ce范围 0.313~20ng/mL 灵敏du 0.188ng/mL

组成:

中wen名称

英wen名称

gui格

保存

  ELISAmei标板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓suo生物素huabbin网zhi

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素huabbin网zhi稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoHRPmei结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

mei结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoxi涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

bbin注册shuoming书

Product  Description

  1 

 

zhi检报gao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuoming
*: [96T/48T](打开bao装后请及shi检cha所you物品shi否齐全完整)
#: 
一周内使觤ei纱嬗冱/span>4℃,需长shijian存fang或duo次使用建议存于-20.                                      

大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian**吸附检ceshi剂盒检ceqian准备gong作:

1. 请提qian20fen钟从bing箱中取出shi剂簒iao胶庵潦襴en。

2. 将浓suoxi涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的fanghui4℃。从bing箱中取出的浓suoxi涤液可nengyou结晶,shu于正常现象,可用40℃水yu微jia热使结晶完全溶解后再配制xi涤液(jia热wendu不要超过50℃,使用shixi涤液应为室wen)。当ri使用。

3. 标准品: 于10000×gli心1fen钟,jia入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准苀enxiao艄芨牵琷ing置10fen钟,shang下颠倒数次,待其充fen溶解后,用yi液器将其轻轻hun匀(浓du为20ng/mL)。然后根据需要jin行bei比稀释(注:不要直接在反应孔中jin行bei比稀释)。建议配制成以下浓du:按zhao稀释方法图例 标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的shang述标准品jia入含you0.5mL标准品&样品稀释液的EP管謝iao琱un匀即可,其余浓du襩ai死嗤啤?nbsp;

4. 生物素huabbin网zhigong作液:shiyanqian计算当次shiyan所需用量(以100μL/孔计),shi际配制shi应duo配制100-200μL。使用qian15fen钟,以生物素huabbin网zhi稀释液稀释浓suo生物素huabbin网zhi(1:100)成gong作浓du。当ri使用。

5. mei结合物gong作液:shiyanqian计算当次shiyan所需用量(以100μL/孔计),shi际配制shi应duo配制100-200μL。使用qian15fen钟,以mei结合物稀释液稀释浓suoHRPmei结合物(1:100)成gong作浓du。

当ri使用。

大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian**吸附检ceshi剂盒标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据shi际用量lai稀释,如200μL/管)

1.使用qian将所you的shi剂和标眏ing簃an均衡至室wen(18-25oC),shi剂不neng直接在37oC溶解。

2.标准品(冻干品):mei瓶标准品jia入标准品稀释液1mL,盖好后室wenjing置大约10fen钟,同shi反复颠倒/搓动以zhu溶解,其浓du为20ng/mL。准备7个稀释标准品的EP管,mei个EP管中jia入500μL的标准品稀释液,如图所示襩ai蝏ei比稀释,标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证shiyan结果you效性,mei次shiyan请使用新的标准品溶液。

      

1. 在各孔中jia入标准品或样品各100μL, 37℃孵育90fen钟

2. jia入100μL 生物素huabbin网zhigong作液,37℃孵育60fen钟

3. xi涤3次

4. jia入100μLmei结合物gong作液, 37℃孵育30fen钟

5. xi涤5次

6. jia入90μL底物溶液, 37℃孵育15fen钟左右

7. jia入50μL终止液,立即在450nm波长chuce量OD值

8. 结果计算

一、操作因素duiELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作不当将引qi絰i蟮膚u差。以下叙述各个步骤中的影响因素。

1.jia样

2.wen育

3.xi涤

4.显se

5.比se

二、灰区的设置通常qing况下,ELISA定性shiyan襶u把粜yu焙汀耙跣yu眑ai报gao结果,两者jianyou一条fen界线被称为“阳性panduan值”(cut-off value,CO值),这shi定性**ce定结果报gao的依据。

三、标本复chaELISA手gong检ce过cheng复杂,影响因素较duo,即使室内zhi控在控,也可neng因孔jian差异而造成结果的差异,因此jia大复cha力dushi保证结果准确性的可靠方法,比如duiHBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可yi、ruo阳性标本及少见模蔶iang募靋e结果jin行复cha。

四、结果panduan和报gao常用下列几謟hi椒ū硎窘峁

1.定性ce定

2.半定量ce定 结果一ban以didu表示。

3.定量ce定 即用yi知量的标准品作一系列稀释后jin行ELISAce定,绘制标准曲线,结果以优良量或单位表示。在ELISA定量检ce中mei一块反应板都必xu绘制相应的标准曲线。

大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian**吸附检ceshi剂盒会出现的问题及解决办法:

1. jia入反应终止液后,没you吸光值或吸光值偏di。

a.原因:未jia入mei标记物。

解决办法:请按zhao操作步骤jin行。

b.原因:shi剂盒内容物未neng充fenhui。

解决办法:确定shi剂盒内容物huiwen后再jin行操作。

c.原因:室wen太di。

解决办法:若室wen太di(<19℃),请于操作步骤4,蕇hi毖映en育shijian。

d.原因:未使用shi剂盒的清xi液清xi。

解决办法: 请用shi剂盒内所提供的清xi液清xi。

e.原因:shi剂盒yi过you效期限。

解决办法:请更换成仍在you效期限内的shi剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或shi平行性不好。

a.原因:wen育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认wen育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因:操作shijian拖太久。

解决办法:请在方法熟练后再jin行操作。

c.原因:微孔jian相互污ran。

解决办法: jia样品shi,请小心wu溅出微孔外,以免造成其它微孔的污ran。

d.原因:标准品或mei标记物所jia入的量不一致。

解决办法:请使用yixiao正过的yi液枪,并确保其与吸蚮en甹ianyou高dumi合衴u

e.原因:添jia样品或shi剂的操作方法不正确。

解决办法:jia样品或shi剂shi,吸头请wu接触微孔。

f.原因:xi板过cheng发生问题(如管路du塞、xi完板后未立刻jin行下一步骤)。

解决办法:请suishijian控xi板机xi板过cheng,xi完后立即jin行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不gou陡)。

a.原因:室wen太高(>25℃)。

解决办法: 若无法jiangdi室内wendu,请蕇hi眘uoduan步骤4的wen育shijian。

b.原因:底物溶液受到污ran。

解决办法: 若发现底物溶液yi呈现淡蓝se,请不要再使用。

c.原因:反应shijian超过太久。

解决办法:请控制反应shijian。

d.原因:mei标记物污ran了盒内其它shi剂。

解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免shi剂jian相互污ran,凡shishi剂(特别shimei标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清xi干jing。(xian以漂白水jinpao,再以清水冲xi干jing,可确保无残liu)

4. 阴性标准品的吸光值di于阳性标准品的吸光值。

a.原因:微孔中的shi剂未neng充fenhun合。

解决办法: shi剂jia完后,需轻敲pan四周使其充fenhun合均匀。

b.原因:xi板过cheng发生问题(同2-f.)。

解决办法:请参考2-f.

c.原因:添jia样品或mei标记物的量不一致。

解决办法: 请参考2-d.

注yi事项:

A zi细阅dushuoming书。

B 检chashi剂盒标签shang的you效期。如果超过you效期,请wu使用。

C 按shuoming书确定所youshi剂齐全(数量、体积)。

D 标本制备要gui范,mei份标本体积要按2-3个复孔以shang的量制备(贮存),尽量fen装做备份。duan期内无法shiyan者,注yidiwen保存。

E 准备好所youshiyan额外所需物品,(比如yi液器,shi管,清xi器,mei标仪)。

F 按shuoming书将所用shi剂平衡至室wen,根据检ce标本数量确定所需shi剂的量。

G 检chashi剂盒内mei謟hi约恋闹嫣跫Vに鵼oushi剂均按zhaoshi剂盒内shuoming书推荐的条件存储。

H 检cha不稳定或者变zhi的shi剂溶液(比如沉淀或变se)。you些shi剂,比如标准品稀释液或者检ce稀释液,可neng在设计shi就含you沉淀物。所youshi剂在di入mei标板之qian,必需充fenhun匀。而由于沉淀物的特性,在jia入mei标板之qian,必需不停搅拌。

I 保证充fen的孵育shijian和wendu。

J 切wu使用不同生产批hao的shi剂取代现youshi剂或hun合现youshi剂。

K 在hun合或溶解蛋白溶液shi,避免pao沫产生。

L 在shiyan开始之qian,癱ai藕胹hiyan流cheng。

M 在shiyan开始之qian,清洁gong作台。

N 若you问题,应与我gong薺ing虼砩痰募际鮶hi持lian系

大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian**吸附检ceshi剂盒结果panduan:

1. mei个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设謒ei纯祝瑉e应取其平均值计算。以标准品的浓du为横坐标,OD謉i葑辏娉霰曜记摺i可以OD謉i嶙辏曜计返呐╠u为纵坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用zhuan业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标准曲线cha出相应的浓du,乘以稀释bei数;yi可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方cheng式,计算出样苀ang╠u,再乘以稀释bei数,即为样品的shi际浓du。

3. 若样品OD值高于标准曲线shang限,应蕇hi毕∈秃髗hongce,计算浓dushi应乘以稀释bei数。

 特异性:

本shi剂盒用于检ce大鼠甲tai蛋白(αFP),经检ce与其它相似物zhi无ming显jiao叉反应。

由于受到技术及样本lai源的限制,不可neng完成秠un鵼ou相关或相似物zhijiao叉反应检ce,因此本shi剂盒you可neng与未经检ce的其它物zhiyoujiao叉反应。

hui收率:

fen别于定值xue清及xue浆样本中jia入一定量的大鼠甲tai蛋白(αFP)(jia标样品),zhong复ce定并计算其均值,hui收率为ce定值与理论值的比率

线性:

在定值xue清及xue浆样本内jia入适量的大鼠甲tai蛋白(αFP),并bei比稀释成 1:21:41:81:16 的待ce样本,线性范围即为稀释后样本中大鼠甲tai蛋白(αFP)含量的ce定值与理论值的比率。


大鼠甲tai蛋白(αFP)meilian**吸附检ceshi剂盒jingmidu:

jingmidu用样品ce定值的变异系数 CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

批内差:取同批次shi剂盒duidi、中、高值定值样本jin衳ie考靋e,mei份样本连续ce定 20 次,fen别计算不同浓du样本的平均值及 SD 值。

批jian差:选取 3 个不同批次的shi剂盒fen别duidi、中、高值定值样本jin衳ie縞e定,mei个样本使用同一shi剂盒zhong复

ce定 8 次,fen别计算不同浓du样本的平均值及 SD 值。

批内差: CV<10%

批jian差: CV<12%

稳定性:

经ce定,shi剂盒在you效期内按推荐wendu保存,其活性jiangdi率小于 5%

为减小外部因素duishi剂盒破坏qian后检ce值的影响,shiyan室的huanjing条件需尽量保持一致,尤其shishiyan室内wendu、湿du及wen育条件。其次由同一shiyan员laijin行操作可减少ren为wu差。


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